農(nóng)桿菌介導的黃瓜花葉病毒移動報告體系研究.pdf

1、微注射法、基因槍轟擊法以及基于煙草花葉病毒和馬鈴薯X病毒的互補分析法是已經(jīng)建立起來的用于鑒定假定移動蛋白和胞間連絲介導的大分子運輸?shù)难芯糠椒ā?br>　　在本研究中，我們在黃瓜花葉病毒(CMV)侵染性克隆的基礎(chǔ)上，建立了一種農(nóng)桿菌介導的用于研究生物大分子胞間移動和長距離移動的移動互補體系。將CMVRNA3上編碼的運動蛋白MP替換為定位至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的erGFP，構(gòu)建成CMV移動缺陷型報告載體pCB301-CMV RNA3-MP∷erGFP。C

2、MV MP的體外表達可以使RNA3-MP∷erGFP報告載體從原始細胞向相鄰細胞有效移動，而CMV MP的突變體M5則不能夠使其發(fā)生移動。該體系的顯著特征是，當CMV RNA1和RNA2存在時，RNA3-MP∷erGFP報告載體一旦從原始細胞中移出，移動信號就會被大量擴增。熒光細胞的最佳觀察時間為浸潤后48-60小時，而煙草浸潤后的最適溫度為25-28℃。其他屬植物病毒的運動蛋白，如番茄斑萎病毒(TSWV)的運動蛋白NSm和水稻條紋病毒

3、(RSV)的運動蛋白NSvc4，也可以使RNA3∷erGFP報告載體從原始表達細胞移動到相鄰細胞中。同樣，該體系也可以鑒定異源病毒屬運動蛋白的長距離移動，通過將CMV RNA3上的MP替換成TSWV NSm或RSV NSvc4，構(gòu)建嵌合突變體病毒，利用農(nóng)桿菌介導將其與CMV的基因組共浸潤本氏煙，發(fā)現(xiàn)它們也可以系統(tǒng)移動。
　　這種利用農(nóng)桿菌介導的CMV移動互補體系簡單、高效且可靠。這種方法為鑒定未知植物病毒可能的運動蛋白以及研究植物