TNF-α誘導類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞增殖相關機制的研究.pdf

1、目的： 類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種常見的以關節(jié)滑膜慢性炎癥性病變?yōu)橹饕憩F(xiàn)的自身免疫性疾病，其病理特征主要表現(xiàn)為，滑膜組織異常增生，炎性細胞浸潤，新生微血管數(shù)量明顯增加，血管翳形成，最終侵蝕關節(jié)軟骨和骨，造成關節(jié)破壞。目前認為，滑膜增厚的主要原因是由于成纖維樣滑膜細胞(fibroblast-like synoviocytes，F(xiàn)LS)的過度增生。且研究發(fā)現(xiàn)，增生的成纖維樣滑膜細胞在功能上

2、處于異?；钴S狀態(tài)，它可以分泌多種促炎性細胞因子、生長因子、趨化因子、基質(zhì)蛋白酶等，并具有轉(zhuǎn)化特性，對骨與軟骨組織造成侵蝕，加速RA關節(jié)破壞。因此，阻止成纖維樣滑膜細胞的增生和活化，對控制RA的發(fā)病和病情進展有重要的意義。 TNF-α (Tumor necrosis factor-alpha)是一種多效性細胞因子，由活化的單核巨噬細胞產(chǎn)生，由于組織特異性的不同，TNF-α對大多數(shù)腫瘤細胞表現(xiàn)為促凋亡作用，而對于T淋巴細胞、B細胞、

3、胸腺細胞則表現(xiàn)為促增殖作用。在RA的FLS上，TNF-α表現(xiàn)為促增殖作用，但具體機制尚不完全清楚。 TNF-α主要通過和不同細胞表面受體結合發(fā)揮其生物學作用，TNF-α有兩個受體，分別為TNFRI和TNFRⅡ，屬Ⅰ型膜蛋白，為腫瘤壞死因子受體家族，二者的胞外結構域有28％的同源性，但胞內(nèi)結構域明顯不同，TNFRI胞內(nèi)具有死亡結構域，而TNFRⅡ卻不含死亡結構域，TNFRI幾乎在所有的細胞上都有表達，但TNFRⅡ只在免疫系統(tǒng)的細胞

4、及內(nèi)皮細胞上表達，分別獨立或共同介導不同的信號傳導通路。 因為TNF-α是通過其受體發(fā)揮作用的。在我們的實驗研究中，我們設想通過用一定濃度的TNF-α作用于RA成纖維樣滑膜細胞，來觀察RA成纖維樣滑膜細胞上TNFRⅠ和TNFRⅡ表達比例的變化，進一步探討TNF-α誘導RA FLS增殖的可能機制。 方法: 1、類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞的原代培養(yǎng)：在無菌條件下取得新鮮的RA滑膜組織，膠原酶消化法分離純化滑膜成纖維

5、細胞，實驗用3-7代細胞。 2、TNF-α作用RA FLS后，HE染色，觀察FLS形態(tài)學的變化。 3、MTT實驗觀察不同濃度的TNF-α對RAFLS增殖的影響。 4、RT-PCR實驗觀察一定濃度的TNF-α作用于RA FLS后，F(xiàn)LS上TNFRⅠ和TNFRⅡ的mRNA表達比例的變化。 結論: 1、TNF-α在體外具有抑制RAFLS凋亡，促進FLS增殖作用。 2、TNF-α在體外可能通過上調(diào)