兩個水稻CYP74家族基因的克隆及其中HPL基因的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、　　CYP74家族是植物細(xì)胞色素P450的一個家族，該家族成員包括AOS(丙二烯氧化物合酶)、HPL(脂氫過氧化物裂解酶)和DES(聯(lián)乙烯醚合酶)。它們都是植物脂肪酸代謝過程中的酶，它們的催化產(chǎn)物在植物對發(fā)育和環(huán)境調(diào)控應(yīng)答的許多過程中都具有重要的作用。本研究通過PCR的策略克隆了水稻中的HPL基因和一個新的AOS基因，并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法進(jìn)行了水稻HPL基因的遺傳轉(zhuǎn)化，此外，還在基因組的水平上研究了CYP74家族在水稻基因組中的分布及

2、特性。所獲得的主要結(jié)果如下：　　1、通過生物信息學(xué)的分析結(jié)合PCR的策略克隆了水稻HPL基因(OsHPL1)，并構(gòu)建了兩個用于轉(zhuǎn)化的雙元表達(dá)載體：pPZPH2a3(+)-HPL1和pPZPH2a3(-)-HPL1。　　2、以農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法用雙元載體pPZPH2a3(+)-HPL1和pPZPH2a3(-)-HPL1分別對水稻品種日本晴(Nipponbare)進(jìn)行了轉(zhuǎn)化，用雙元載體pPZPH2a3(-)-HPL1對水稻品種北陸(PL2

3、)進(jìn)行了轉(zhuǎn)化。上述三組轉(zhuǎn)化總計獲得了77個轉(zhuǎn)基因單株?！　?、通過生物信息學(xué)的分析結(jié)合PCR的策略發(fā)現(xiàn)并克隆了一個新的水稻AOS基因(OsAOS2)。構(gòu)建了包含該基因全長的大腸桿菌原核表達(dá)載體pET30a-AOS2。初步的大腸桿菌原核表達(dá)實(shí)驗(yàn)表明OsAOS2基因在大腸桿菌體內(nèi)是以包涵體的形式表達(dá)的，且表達(dá)量與IPTG誘導(dǎo)劑的濃度有關(guān)?！　?、用生物信息學(xué)的方法對CYP74家族在水稻基因組內(nèi)的分布進(jìn)行了研究。BLAST分析表明，在水稻