AhR活化對CD8αα+TCRα β+IELs的調(diào)節(jié)在結(jié)腸炎炎癥緩解中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景與目的：
　　炎癥性腸病是一類由多種原因引起的，慢性復(fù)發(fā)性炎癥性疾病，主要累及結(jié)腸。研究表明，腸道免疫系統(tǒng)在炎癥性腸病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要的作用。另外，越來越多的證據(jù)表明：腸道黏膜免疫在腸道炎癥的發(fā)生發(fā)展中有著重要的作用。近期研究發(fā)現(xiàn)，固有免疫系統(tǒng)的缺陷能促進(jìn)腸道的損傷性免疫反應(yīng)發(fā)生，如果該缺陷能夠糾正也許能夠提高炎癥性腸病的治療效果。
　　腸上皮間淋巴細(xì)胞(Intestinal intraepithelial lym

2、phocytes，IELs)定植于腸上皮，根據(jù)其表型及起源可以將其分為傳統(tǒng)型與非傳統(tǒng)型。非傳統(tǒng)型主要包括CD8αα+TCRαβ+和TCRγδ+IELs。TCRγδ+IELs在黏膜穩(wěn)態(tài)中主要發(fā)揮保護(hù)性的作用。CD8αα+TCRαβ+IELs的功能和TCRγδ+IELs相似。CD8αα+TCRαβ+IELs對腸道免疫功能具有調(diào)節(jié)作用，研究表明CD8αα+TCRαβ+IELs能夠緩解腸道炎癥在黏膜穩(wěn)態(tài)中主要發(fā)揮保護(hù)性作用。
　　芳香烴受

3、體是一類配體依賴的核轉(zhuǎn)錄因子，控制著多種免疫細(xì)胞的發(fā)育及功能包括IELs和巨噬細(xì)胞。6甲?；胚岵3，2-b]咔唑是芳香烴受體內(nèi)源性的配體。研究表明，6甲酰基吲哚并[3，2-b]咔唑能夠通過激活芳香烴受體抑制慢性炎癥，下調(diào)Th1相關(guān)的的細(xì)胞因子。有趣的是，在克羅恩病患者的腸道中芳香烴受體表達(dá)是下調(diào)的，而芳香烴受體對CD8αα+TCRαβ+和TCRγδ+IELs的發(fā)育有著重要的作用。以上結(jié)論提示6甲?；胚岵3，2-b]咔唑可能通過激

4、活A(yù)hR調(diào)控非傳統(tǒng)型IELs并影響急性結(jié)腸炎。
　　方法：
　　1.結(jié)腸炎模型的構(gòu)建，含有3％DSS的飲用水喂養(yǎng)小鼠7d。記錄小鼠體重及狀態(tài)，取結(jié)腸組織進(jìn)一步測量長度并提取IELs檢測。
　　2.流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)腸非傳統(tǒng)型IELs比例及數(shù)量的變化，熒光定量PCR及流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞因子的表達(dá)。
　　3.小鼠喂養(yǎng)3％DSS于笫2天開始進(jìn)行腹腔注射FICZ。體質(zhì)量、疾病活動指數(shù)及HE染色確定結(jié)腸結(jié)腸炎癥的變化。流式細(xì)

5、胞術(shù)檢測非傳統(tǒng)型IELs的變化，熒光定量PCR和流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞因子的變化。
　　結(jié)果：
　　1.與對照組相比，DSS組小鼠體重從第四天開始下降，并且其結(jié)腸長度短于對照組。
　　DSS組疾病活動指數(shù)從第三天開始增加，組化結(jié)果表明DSS組結(jié)腸黏膜結(jié)構(gòu)紊亂、斷裂，但在腹腔注射FICZ后上述損傷明顯緩解。
　　2.DSS組結(jié)腸CD8αα+TCRαβ+IELs的比例明顯低于對照組，在數(shù)量上得到的結(jié)果也是具有意義的。FI

6、CZ能夠明顯逆轉(zhuǎn)該變化，與DSS組相比，F(xiàn)ICZ能夠明顯促進(jìn)IELs中CYP1A1的表達(dá)。
　　3.與對照組相比，DSS組CD8αα+TCRαβ+IELs的凋亡率明顯高于對照組，而FICZ能夠下調(diào)DSS組CD8αα+TCRαβ+IELs的凋亡率。DSS組CD8αα+TCRαβ+IELs中AhR、IL15Rα、CD122、CD132的表達(dá)明顯低于對照組，而注射FICZ后CD8αα+TCRαβ+IELs內(nèi)AhR、IL15Rα、CD12

7、2、CD132的表達(dá)明顯升高。
　　4.與對照組相比，DSS組中IELs表達(dá)的IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-6明顯升高，而TGF-β1無變化，IL-10下調(diào)，表達(dá)IFN-γ的CD8αα+TCRαβ+IELs比例也明顯升高，表達(dá)IL-10的CD8αα+TCRαβ+IELs比例明顯下調(diào)，在注射FICZ后上述結(jié)果得到逆轉(zhuǎn)。
　　結(jié)論：
　　1.FICZ顯著緩解DSS誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎。
　　2.AhR活化