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文檔簡(jiǎn)介
1、目的：構(gòu)建攜帶人FBP17基因真核重組質(zhì)粒p3×FLAG-CMV-10/FBP17，并轉(zhuǎn)染人正常肝細(xì)胞LO2，驗(yàn)證己轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒p3×FLAG-CMV-10/FBP17的LO2高表達(dá)FBP17，為FBP17相互作用蛋白研究打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
方法：
(1)構(gòu)建重組質(zhì)粒p3×FLAG-CMV-10/FBP17。通過(guò)酶切pEGFP-C1-FBP17質(zhì)粒，產(chǎn)物純化后與p3×FLAG-CMV-10載體進(jìn)行連接反應(yīng)，構(gòu)建
2、p3×FLAG-CMV-10/FBP17真核重組質(zhì)粒。(2)脂質(zhì)體法將真核重組質(zhì)粒p3×FLAG-CMV-10/FBP17轉(zhuǎn)染人正常肝細(xì)胞LO2。(3)應(yīng)用RT-PCR和Western Blotting檢測(cè)驗(yàn)證真核重組質(zhì)粒p3×FLAG-CMV-10/FBP17在人正常肝細(xì)胞LO2中高表達(dá)，XTT法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞存活率的影響。
結(jié)果：(1)成功地構(gòu)建真核表達(dá)重組質(zhì)粒p3×FLAG-CMV-10/FBP17。(2)成功將真核表
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