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文檔簡介
1、目的:優(yōu)化傳統(tǒng)中藥砒霜主要成分三氧化二砷(As2O3)的新型制劑的制備工藝,提高新型制劑的質(zhì)量指標(biāo),減少As2O3的毒性并探討其對膀胱癌的殺傷作用,為進(jìn)一步開展靶向制劑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
方法:在單因素考察油相粘度、油水相體積比、白蛋白水溶液濃度、水相的pH值、固化劑種類、固化劑用量,乳化劑用量及乳化時(shí)間、固化時(shí)間等的基礎(chǔ)上,進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),對影響因素進(jìn)行方差分析,結(jié)合實(shí)際情況篩選出新型制劑即三氧化二砷白蛋白納米球(As2O
2、3-BSA-NP)的最佳制備工藝條件。采用透視電鏡觀察納米球粒徑大小,二乙基二硫代甲酸銀法建立砷標(biāo)準(zhǔn)曲線測定納米球的載藥量、包封率。將納米球密封,分別置于冰箱(3-5℃)、室溫37℃,放置三個(gè)月考察其穩(wěn)定性。體外培養(yǎng)膀胱癌EJ細(xì)胞。將制備的納米球與單純的三氧化二砷(As2O3)兩種劑型分別作用,用MTT法比較兩種不同劑型對膀胱癌EJ細(xì)胞的殺傷效果。利用激光共聚焦顯微鏡觀察兩種劑型對EJ細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡。
結(jié)果:納米球最佳制備工
3、藝為乳化-熱固化法。正交設(shè)計(jì)考察的4個(gè)因素中,高速分散速度對總優(yōu)化指數(shù)影響最大(P<0.01),其次是固化時(shí)間和油相/水相比(P<0.05),乳化劑對指數(shù)幾乎沒有影響(P>0.05)。考察制得納米球的平均粒徑為100±50nm,粒度分布在50-250nm之間。納米球表面光滑、圓整、流動(dòng)性好。三氧化二砷白蛋白納米球(As2O3-BSA-NP)的平均載藥量19.8%,平均包封率51.3%。納米球體外釋放顯示,乳化-熱固化法制備的納米球釋放藥
4、物緩慢,10h釋放總藥量的14.98%。納米球疏水、粒徑分布均勻,強(qiáng)度合乎要求,在4℃、25℃、37℃放置三個(gè)月,納米球外觀形態(tài)、載藥量、包封率及釋放度均無明顯變化。MTT實(shí)驗(yàn)表明,三氧化二砷白蛋白納米球(As2O3-BSA-NP)劑型與單純?nèi)趸?As2O3)相比抑制率增強(qiáng),納米球制劑增強(qiáng)了三氧化二砷(As2O3)的藥效,對細(xì)胞的抑制率最高可達(dá)到93.1%士3.1%。激光共聚焦顯微鏡觀察顯示細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化。
結(jié)論
5、:優(yōu)化新型制劑制備工藝,以乳化-熱固化法制備三氧化二砷白蛋白納米球(As2O3-BSA-NP)的工藝簡單可行,無有機(jī)溶劑殘留,減少殘留有害溶劑對人體的傷害。洗滌溶劑乙醚沸點(diǎn)低,易回收,減少了對環(huán)境的污染。納米球粒徑分布均勻,粒徑小。載藥量,包封率,回收率提高。采用三氧化二砷白蛋白納米球(As2O3-BSA-NP)對膀胱癌細(xì)胞進(jìn)行殺傷,不僅解決了藥物性低,毒副作用大的問題,還通過納米球中藥物的緩慢釋放而大大減少了給藥次數(shù),減輕了病人痛苦和
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