小泛素相關(guān)修飾蛋白1介導(dǎo)的沉默信息調(diào)節(jié)因子1SUMO化修飾及TOLL樣受體因子3在成年大鼠心肌缺血預(yù)處理中的機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　1.證實(shí)成年大鼠心肌缺血預(yù)處理(ischemia-preconditioning，IPC)通過正性調(diào)控小泛素相關(guān)修飾蛋白1(small ubiquitin-relatedmodifier1，SUMO-1)介導(dǎo)的沉默信息調(diào)節(jié)因子1(Slient informationregulator1，SIRT-1)的SUMO化修飾，達(dá)到減輕心肌缺血再灌注損傷(ischemia-reperfusion injury，I/R)的作用。<

2、br>　　2.觀察Toll樣受體3（Toll like receptor-3，TLR3）在成年大鼠心肌缺血再灌注損傷中表達(dá)的變化，探討其在心肌缺血再灌注損傷中可能的作用與意義。
　　方法:
　　1.建立動(dòng)物模型:SD大鼠48只，雄性，體重200～250 g，隨機(jī)分為3組（n=16）:假手術(shù)組（S組）、缺血再灌注組(I/R組)、預(yù)處理缺血再灌注組(IPC組)。S組為左冠狀動(dòng)脈前降支(left anteriordescendin

3、g coronary artery，LAD)放置穿線但不結(jié)扎。I/R組壓迫結(jié)扎LAD30min后再灌注120min。IPC組為壓迫結(jié)扎LAD5min松開5min，共三個(gè)循環(huán)，再停灌30min，最后再灌注120min。再灌注120min時(shí)處死大鼠，取心臟組織，存放于液氮罐中備用。
　　2.SIRT-1蛋白SUMO化修飾相關(guān)指標(biāo)測(cè)定:各組心肌梗死體積(TTC)測(cè)定，Western blots檢測(cè)各組SUMO-1、SUMO特異性蛋白酶1

4、（sentrin/SUMO-specific protease1，SENP-1）、SIRT-1蛋白表達(dá)量，免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation、CO-IP）檢測(cè)各組SIRT-1/SUMO-1復(fù)合物蛋白表達(dá)量。
　　3.TLR3相關(guān)指標(biāo)測(cè)定:Elisa法檢測(cè)血清LDH、CK活性及TNF-α濃度， TLR3 mRNA、蛋白表達(dá)量分別由RT-PCR、Western blots檢測(cè)，免疫組化檢測(cè)TLR3蛋白的表達(dá)。

5、r>　　結(jié)果:
　　1.與S組比較，I/R組和IPC組心肌梗死體積百分比升高;與I/R組比較， IPC組心肌梗死題體積百分比降低(P＜0.01)。與S組比較，I/R組和IPC組SIRT-1、SUMO-1蛋白表達(dá)量降低(P＜0.01);與I/R組比較， IPC組SIRT-1、SUMO-1蛋白表達(dá)量升高(P＜0.01)。與S組比較，I/R組和IPC組SENP-1、SIRT-1/SUMO-1復(fù)合物蛋白表達(dá)量升高（P＜0.01）;與I/R

6、組比較， IPC組SIRT-1/SUMO-1復(fù)合物蛋白表達(dá)量升高（P＜0.01），SENP-1蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2.與S組比較，I/R組和IPC組血清LDH、CK活性及TNF-α濃度升高， TLR3 mRNA、蛋白呈強(qiáng)烈高表達(dá)(P＜0.01)。與I/R組比較，IPC組血清LDH、CK活性及TNF-α濃度，TLR3 mRNA、蛋白表達(dá)明顯降低(P＜0.01)。免疫組化結(jié)果顯示，S組TLR3呈微弱表達(dá)于胞