Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞在聚乙二醇干擾素治療HBeAg陽(yáng)性慢性乙型肝炎過(guò)程中的作用研究.pdf

1、HBV感染是世界范圍內(nèi)重大的健康問(wèn)題之一，部分的乙肝病毒感染者最終發(fā)展為肝硬化或肝癌。前期的研究認(rèn)為在慢性乙型肝炎的發(fā)展過(guò)程中細(xì)胞免疫發(fā)揮了重要作用，尤其是HBV特異性的CD4+T以及CD8+T細(xì)胞在對(duì)HBV感染的控制中起至關(guān)重要的作用。隨著免疫學(xué)研究的進(jìn)展，越來(lái)越多的免疫細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)，它們通過(guò)復(fù)雜的機(jī)制，在慢性乙型肝炎的發(fā)生發(fā)展及臨床轉(zhuǎn)歸過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。Th17和Treg細(xì)胞是兩種新發(fā)現(xiàn)的CD4+T細(xì)胞亞群，在功能上分別為促進(jìn)和抑

2、制免疫應(yīng)答，研究發(fā)現(xiàn)在正常情況下兩種細(xì)胞處于一種免疫平衡狀態(tài)，但我們前期的研究結(jié)果顯示在慢性乙型肝炎患者體內(nèi)這種平衡被打破。本實(shí)驗(yàn)旨在探索聚乙二醇干擾素治療慢性乙肝的過(guò)程中，T輔助細(xì)胞(Th1、Th2、Th17和Treg細(xì)胞)的變化特征以及在抗病毒治療過(guò)程中的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，并分析Th17/Treg細(xì)胞免疫平衡在HBV持續(xù)感染的過(guò)程中所發(fā)揮的作用。
　　方法：
　　選取未經(jīng)抗HBV治療的HBeAg+慢性乙型肝炎患者11例，按常

3、規(guī)劑量和方法給予聚乙二醇干擾素抗病毒治療48w，收集患者在基線、治療4、8、12、24、32、40、48周時(shí)的外周血，采用流式抗體進(jìn)行細(xì)胞膜表面和胞內(nèi)染色技術(shù)，運(yùn)用流式細(xì)胞儀對(duì)其單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中Th1、Th2、Th17、Treg等細(xì)胞的表達(dá)水平進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測(cè)，同時(shí)在每個(gè)治療時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)受試者的相關(guān)臨床指標(biāo)(ALT，HBV-DNA，TB及乙肝表面標(biāo)志物等)，分析在抗病毒治療過(guò)程中各細(xì)胞的變化趨勢(shì)，并觀察相互之間是否具有相關(guān)性，及與HB

4、V-DNA定量和ALT水平之間是否具有相關(guān)性。同時(shí)選取健康志愿者20例作為對(duì)照組。
　　結(jié)果：
　　1.干擾素治療過(guò)程各時(shí)間點(diǎn)外周血Th17、Treg、Th1、Th2細(xì)胞的變化趨勢(shì)：在治療前8周，Th17細(xì)胞呈上升趨勢(shì)，在8周至40周期間呈現(xiàn)為折線形波動(dòng)，至48周時(shí)又出現(xiàn)緩慢升高。Treg細(xì)胞則于前4周快速升高，4周到8周時(shí)又迅速下降，前8周內(nèi)以第4周為分界出現(xiàn)倒”V”形變化，隨后呈緩慢波動(dòng)，無(wú)明顯升降趨勢(shì)。在治療過(guò)程中，T

5、h17細(xì)胞在4周、8周、48周時(shí)的表達(dá)頻率與基線相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，其中24周時(shí)的表達(dá)頻率較基線相比差異更為明顯(p<0.01)。Treg細(xì)胞僅治療4周時(shí)的表達(dá)頻率與基線相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。在干擾素治療前4周，Th1細(xì)胞呈快速下降趨勢(shì)，治療4-24周期間，其表達(dá)出現(xiàn)緩慢波動(dòng)，24周后又呈現(xiàn)出明顯升高趨勢(shì)，至40周后則快速下降，Th2細(xì)胞在治療過(guò)程中表現(xiàn)為水平狀波動(dòng)趨勢(shì)，無(wú)明顯變化。在治療過(guò)程中，Th1

6、細(xì)胞在4周、8周、12周、24周、48周時(shí)的表達(dá)頻率與基線相比有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.001)，治療32周、40周時(shí)的表達(dá)頻率較基線相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。Th2細(xì)胞在治療8周、24周、40周時(shí)的表達(dá)頻率與基線相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，Th17細(xì)胞在CHB患者中的表達(dá)頻率明顯高于健康對(duì)照組(p<0.05)，Th2細(xì)胞在CHB組中的表達(dá)明顯高于HC組(p<0.05)。CHB組中的Th17/Treg

7、比率與HC組相比明顯升高(p<0.01)，Th1/Th2細(xì)胞比率與HC組相比降低(p<0.05)。
　　2.以治療48周時(shí)HBeAg下降至1COI為界分為eAg陽(yáng)性組(>1COI)和eAg轉(zhuǎn)換組(<1COI)，分析eAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換患者及eAg陽(yáng)性患者外周血各細(xì)胞比例的差異：在干擾素治療前4周，兩組中的Th1細(xì)胞均呈現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)，在治療4周到40周期間表現(xiàn)為波動(dòng)狀上升趨勢(shì)，至治療48周時(shí)，兩組中Th1細(xì)胞的表達(dá)又迅速降低，整體表現(xiàn)

8、為下降趨勢(shì)，兩組沒(méi)有明顯差別(p<0.05)。在治療前8周，eAg轉(zhuǎn)換組中。Th2細(xì)胞呈明顯上升趨勢(shì)，之后出現(xiàn)緩慢波動(dòng)，至治療40周后明顯下降，eAg陽(yáng)性組則始終表現(xiàn)為水平波動(dòng)趨勢(shì)，至治療40周后，也表現(xiàn)為明顯下降。在治療前8周，兩組中Th17細(xì)胞均表現(xiàn)為明顯上升趨勢(shì)，之后eAg陽(yáng)性組繼續(xù)出現(xiàn)上升趨勢(shì)，至治療24周后明顯下降，eAg轉(zhuǎn)換組則始終呈水平波動(dòng)趨勢(shì)，兩組在治療48周時(shí)Th17細(xì)胞的比例達(dá)到相似水平。在治療前4周，兩組中Treg

9、細(xì)胞呈明顯上升趨勢(shì)，之后兩組均呈現(xiàn)波動(dòng)狀下降趨勢(shì)。
　　3.在peg-IFN治療過(guò)程中外周血中各細(xì)胞比例與HBV-DNA、ALT的相關(guān)性分析：經(jīng)Pearson correlation統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示Th1與Treg細(xì)胞比例在基線時(shí)表現(xiàn)為顯著正相關(guān)性(p<0.001)，TH2與TH17細(xì)胞在基線時(shí)也表現(xiàn)為正相關(guān)(p<0.05)，在治療過(guò)程中Th17與Treg細(xì)胞、Th1與Th2細(xì)胞的變化均呈相反趨勢(shì)，Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞在治

10、療24周、32周時(shí)呈負(fù)相關(guān)性(p<0.05)，Th1細(xì)胞與Th2細(xì)胞在治療24周時(shí)表現(xiàn)為負(fù)相關(guān)(p<0.05)。在治療12周及24周時(shí)，Th17/Treg比例與HBV-DNA之間呈負(fù)相關(guān)(p<0.05)，Th1/Th2比例與HBV-DNA之間無(wú)明顯相關(guān)性，Th1細(xì)胞與Th17細(xì)胞在治療12周時(shí)均與HBV-DNA定量間存在正相關(guān)性(p<0.05)。
　　結(jié)論：
　　在慢性乙型肝炎患者體內(nèi)，Th17細(xì)胞處于功能活躍狀態(tài)，而Tre