錯配修復(fù)蛋白基因多態(tài)性與少精、無精癥的相關(guān)性研究.pdf

1、目的： 建立四引物擴(kuò)增受阻突變體系（tetra-Primer Amplification Refractory Polymorphism System-Polymerase Chain Reaction，4P-ARMS-PCR）方法學(xué)；分析錯配修復(fù)蛋白基因多態(tài)性與少精、無精癥的關(guān)系，從而為少精、無精癥病因研究探索新的途徑。 方法： 1.以錯配修復(fù)蛋白MLH3基因C2531T多態(tài)性為例建立4P-ARMS-PCR方法

2、學(xué)。 2.4P-ARMS-PCR檢測錯配修復(fù)蛋白MSH4基因G289A多態(tài)性。 3.4P-ARMS-PCR檢測錯配修復(fù)蛋白MSH4基因A1766G多態(tài)性。 4.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性分析法（Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism， PCR-RFLP）檢測錯配修復(fù)蛋白MSH5基因C85T多態(tài)性。 結(jié)果

3、： 1.4P-ARMS-PCR檢測錯配修復(fù)蛋白MLH3基因C2531T多態(tài)性結(jié)果完全符合PCR-RFLP、DNA測序驗證結(jié)果。 2.少精、無精組與正常對照組MLH3 C2531T基因型的分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律（少精、無精組：X2=0.012，P>0.05；正常對照組：X2=1.430，P>0.05），所選人群具有代表性?；颊吆驼φ战MMLH3 C2531T的基因型分布存在明顯的差異，CT+TT基

4、因型在患者中有明顯的流行（X2=8.695，P<0.05，OR=1.975，95％CI：1.230～3.173）；T等位基因的頻率在患者組顯著高于正常對照組（X2=10.631，P<0.05， OR=2.250，95％CI：1352～3.744）。 3.未檢測到錯配修復(fù)蛋白MSH4基因G289A多態(tài)性。 4.未檢測到錯配修復(fù)蛋白MSH4基因A1766G多態(tài)性。 5.少精、無精組與正常對照組MSH5 C85T基因型

5、的分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律（少精、無精組：X2=0.113，P>0.05；正常對照組：X2=0.626，P>0.05），所選人群具有代表性?；颊吆驼φ战MMSH5 C85T的基因型分布存在明顯的差異，CT+TT基因型在患者中有明顯的流行（X2=11.829， P<0.05，OR=2.507，95％CI：1.428～4.400）； T等位基因的頻率在患者組顯著高于正常對照組（X2=14.195，P<0.05，OR=

6、2.887，95％CI：1599～5.211）。 6.對少精、無精組和正常對照組進(jìn)行MLH3 C2531T、MSH5 C85T基因多態(tài)性的聯(lián)合分析顯示：兩基因型在少精、無精組和正常對照組的分布存在明顯的差異（X2=18.181，P<0.05）；同時表達(dá)MLH3C2531T（CT+TT）和MSH5 C85T（CT+TT）基因型的個體少精、無精癥發(fā)病的危險性最大（X2=15.653，P=0.000， OR=6.775.95％CI：2

7、.117～21.683）。 結(jié)論： 1.4P-ARMS-PCR可快速、簡便、準(zhǔn)確檢測基因單核苷酸突變（single nucleotide polymorphism， SNP）。 2.錯配修復(fù)蛋白MLH3基因C2531T多態(tài)性與少精、無精癥存在相關(guān)性，其中CT+TT基因型可能是疾病發(fā)生的危險因素，T等位基因可能是該疾病的遺傳易感基因。 3.錯配修復(fù)蛋白MSH5基因C85T多態(tài)性與少精、無精癥存在相關(guān)性，其中