豬帶絳蟲HSP70-4真核表達及其免疫佐劑效應研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、豬囊尾蚴病是豬帶絳蟲的幼蟲—囊尾蚴所引起的一種重要的人畜共患寄生蟲病,被世界衛(wèi)生組織列為17種最易被忽略的熱帶病之一。該病呈世界性分布,不僅給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的損失,同時還威脅著人類的身體健康。雖然廣譜抗蠕蟲藥吡喹酮、丙硫咪唑對豬囊尾蚴病有一定的治療效果,但其副作用嚴重,長期使用還會產(chǎn)生耐藥性。因此,疫苗的研究顯得尤為重要。豬帶絳蟲六鉤蚴TSOL18重組蛋白作為主要的候選抗原之一,具有較好的免疫保護力,但穩(wěn)定性較差,分子量?。▋H為16k

2、u),對其免疫效果造成了一定影響。
  熱休克蛋白70(HSP70)是一類在結構和功能上高度保守的蛋白,具有分子伴侶、抗原遞呈、抗感染免疫、抑制細胞凋亡等作用,現(xiàn)已被廣泛用作佐劑或抗原載體來增強疫苗的免疫保護力。為了提高豬帶絳蟲六鉤蚴TSOL18重組蛋白的穩(wěn)定性以及免疫保護力,我們開展了將豬帶絳蟲 HSP70-4(TsHSP70-4)作為免疫佐劑的研究,目的是為豬帶絳蟲基因工程疫苗免疫佐劑的選擇提供新的思路。研究取得了如下結果:<

3、br>  1.參考GeneDB中豬帶絳蟲基因組注釋信息,設計特異性引物,RT-PCR獲得TsHSP70-4 ORF序列,全長為1953bp。根據(jù)畢赤酵母密碼子偏好性,對 TsHSP70-4基因密碼子進行優(yōu)化,連接載體pPIC9K,在畢赤酵母中進行高效表達,獲得大小約為95kD的重組蛋白。Western-blot檢測及質譜分析表明,獲得的重組蛋白即為TsHSP70-4。
  2.將TsHSP70-4用柔性linker與豬帶絳蟲六鉤蚴

4、TSOL18的N端相連,在畢赤酵母中誘導表達,獲得了大小約為115kD的融合蛋白TsHSP70-4-TSOL18。
  3.以TsHSP70-4作為佐劑,與TSOL18混合免疫(即TsHSP70-4+TSOL18免疫組)可以延長其在小鼠體內的作用時間;在免疫的第18天,該免疫組小鼠血清中 IL-4、IFN-γ的濃度與TSOL18免疫組相比較,存在顯著提高;在第21天,該免疫組小鼠血清中IL-10的濃度與TSOL18免疫組比較,有明

5、顯增強;在第21天和第28天,對全血T淋巴細胞亞群測定分析,該免疫組 CD3+CD4+的百分率均有顯著提高。由此可知,TsHSP70-4與TSOL18混合免疫,可以延長TSOL18在體內的滯留時間,增強機體的免疫應答能力,特別是體液免疫水平。
  4.用 TsHSP70-4-TSOL18融合蛋白免疫小鼠,獲得的免疫效果遠低于 TsHSP70-4+TSOL18免疫組和TSOL18免疫組。
  綜合上述,TsHSP70-4可以作

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