普通針毛蕨總黃酮抗腫瘤作用及其藥代動力學(xué)初步研究.pdf

1、普通針毛蕨Macrothelypteris torresiana (Gaud.) Ching廣泛分布于長江流域以南各省，資源十分豐富。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)由該植物提取制備的總黃酮類成分部位具有良好的抗腫瘤作用，其中主要化合物原芹菜素的含量占總黃酮提取物的重量百分比達(dá)45％以上。為了進(jìn)一步探討普通針毛蕨總黃酮抗腫瘤作用及其成藥性，本課題圍繞普通針毛蕨總黃酮有效部位進(jìn)行了普通針毛蕨藥材及其總黃酮提取物的質(zhì)量評價研究；探討了普通針毛蕨總黃酮提

2、取物羥丙基β-環(huán)糊精包合工藝；對普通針毛蕨總黃酮包合劑與CMC-Na混懸劑平行對比進(jìn)行了急性毒性、亞急性毒性、體內(nèi)抗腫瘤及藥代動力學(xué)等一系列探索性研究。
　　 參照《中國藥典》2005年版一部附錄IX K所載灰分測定法、IX H所載水分測定法對10批干燥至恒重的普通針毛蕨細(xì)粉的總灰分、酸不溶性灰分及水分進(jìn)行測定。以前期化學(xué)研究獲得該藥材的標(biāo)志成分原芹菜素為對照，參照《中國藥典》2005年版一部附錄VA所載紫外-可見分光光度法檢測

3、樣品中總黃酮的含量，HPLC法測定樣品總提取物中原芹菜素含量，結(jié)果顯示：生藥材中總灰分不得超過8.31％，酸不溶性灰分不得超過3.90％，水分不得超過15.01％，t檢驗顯示，上述指標(biāo)，因產(chǎn)地不同，無顯著性差異(p>0.05)；生藥材中總黃酮成分不得低于3.31％，原芹菜素的含量不得低于0.84％；黃酮總提取物中原芹菜素含量不得低于37.06％。T檢驗顯示，普通針毛蕨生藥材中，因產(chǎn)地不同，總黃酮及原芹菜素含量有一定的差異(0.01

4、0.05)。
　　 應(yīng)用經(jīng)典藥理學(xué)研究方法對普通針毛蕨總黃酮提取物混懸劑與包合劑進(jìn)行了急性毒性評價實驗，按體重最高劑量6.67、2.14 g kg-1、以0.75組間距為稀釋等級系數(shù)，共設(shè)8個劑量組，一次性小鼠灌胃給藥，觀察7天，Bliss法計算結(jié)果得出其LD50分別為2.7555、0.8707 g kg-1；亞急性毒性混懸劑按600、60、6 mg kg-1，包合劑按400、40、4 mg kg-1體重給藥，每日一次，連續(xù)灌胃

5、給藥14天，結(jié)果所有樣品組的臟器系數(shù)、尿素氮、轉(zhuǎn)氨酶與陰性對照組比較無顯著性差異(p>0.05)，但臟器HE染色切片結(jié)果顯示高劑量組有輕微肝細(xì)胞顆粒變性，其它臟器未見損傷，兩種劑型間無顯著性差異。
　　 體內(nèi)抗腫瘤試驗采用移植腫瘤S180荷瘤小鼠，以普通針毛蕨總黃酮水溶液和混懸劑均按體重60、30、15 mg kg-1灌胃給藥、包合劑按體重40、20、10mg kg-1灌胃給藥，陽性對照組均為五氟尿嘧啶20mg kg-1、陰性對

6、照組均為生理鹽水等容量給藥。每日2次，連用10天，結(jié)果顯示水溶液抑瘤率較低(<33.14)，而混懸劑(35.23-56.35％)、包合劑(25.45-54.57％)抑瘤率明顯提高；后兩者在本組內(nèi)高、中劑量組間比較無顯著性差異(p>0.05)，低劑量組與高、中劑量組間有顯著性差異(p<0.05)。與陽性對照組比較，包合劑和混懸劑的高、中劑量組無顯著性差異(p>0.05)，水溶液各劑量組有顯著性差異(p<0.05)。
　　 藥代動力

7、學(xué)研究以普通針毛蕨總黃酮混懸劑與包合物二種劑型均按體重100、200、300mg kg-1，大鼠灌胃給藥。采用Das 2.0、二室模型(two compartment model)和統(tǒng)計矩法(noncompartment model)進(jìn)行分析，兩者在大鼠體內(nèi)均表現(xiàn)出明顯的線性動力學(xué)特征，AUC與劑量成正比、消除半衰期與劑量無關(guān)，動力學(xué)過程基本一致。但是包合物延長了半衰期、縮短了達(dá)峰時間，峰濃度有所提高。總黃酮中原芹菜素在肝、腎、肺、脾、

8、心等血流充沛的器官中分布較多，乳房、卵巢、子宮組織中有一定分布，腦、肌肉、脂肪分布較少。膽汁、尿液、糞便均有原芹菜素原型物排泄，且尿液>糞便>膽汁。包合物的糞便排泄量明顯減少，說明胃腸吸收明顯提高。血液、臟器組織中普遍存在一個新的代謝產(chǎn)物，由何而來？為何物？尚待進(jìn)一步深入研究。
　　 應(yīng)用平衡透析法進(jìn)行了普通針毛蕨主要黃酮化合物原芹菜素的血漿蛋白結(jié)合率研究，結(jié)果顯示原芹菜素人血藥透析袋內(nèi)外平衡時間約為10h，在低、中、高(200

9、、500、1000μg L-1)濃度下，其血漿蛋白結(jié)合率為90.5±1.2％、89.6±1.7％、91.4±1.4％；鼠血藥透析袋內(nèi)外平衡時間約為6 h，在低、中、高(200、500、1000μg L-1)濃度下，鼠血漿蛋白結(jié)合率為80.7±2.2％、81.1±1.8％、81.9±1.3％。T檢驗說明原芹菜素在人、鼠血漿蛋白結(jié)合率之間有顯著差異(p<0.01)，但同一樣品低、中、高濃度之間，蛋白結(jié)合率無顯著性差異(p>0.05)。說明原