雞生長與免疫抑制綜合征病毒單克隆抗體的制備和免疫組化法的建立.pdf

1、將雞生長與免疫抑制綜合征病毒(Chickenstuntandimmunosupressionsyndromevirus,CSISV)尿囊腔接種SPF雞胚繁殖病毒,用差速離心法純化病毒,用純化的病毒免疫雌性Ba1b/c小鼠。免疫后小鼠的脾臟細(xì)胞與NSO骨髓瘤細(xì)胞在PEG-1500的誘導(dǎo)下進(jìn)行融合,融合率達(dá)96.88％,陽性率為4.84％。經(jīng)過間接ELISA的篩選和有限稀釋克隆,獲得了一株能分泌CSISV抗體的雜交瘤細(xì)胞-3H10。經(jīng)間接E

2、LISA測定,3H10細(xì)胞上清的效價為1:320,用3H10細(xì)胞制備的小鼠腹水效價為1:8.2×106。經(jīng)連續(xù)傳代、凍存、復(fù)蘇,3H10雜交瘤細(xì)胞株能穩(wěn)定分泌抗體(3H10-McAb)。
　　 用捕獲ELISA法對3H10—McAb的亞類鑒定為IgG2a;用間接ELISA法對3H10-McAb進(jìn)行了特異性鑒定,結(jié)果顯示,3H10—McAb不與空白尿囊液發(fā)生反應(yīng),也不與:[BDV、NDV、IBV等病毒發(fā)生交叉反應(yīng)；Western-

3、blot試驗證明3H10-McAb能與CSISV病毒p30蛋白發(fā)生特異反應(yīng)。
　　 用制備的單克隆抗體,以單抗1:80稀釋,4℃過夜；二抗1:30稀釋,37℃下作用30min；DAB顯色5分鐘；Harrys蘇木素1:5稀釋后,復(fù)染25s為最佳條件。建立了HRP標(biāo)記的免疫組化法,檢測到人工感染CSISV的肉仔雞肝臟和腎臟均為陽性,表明3H10—McAb能與組織中的病毒良好結(jié)合,能有效檢測到感染組織中的CSISV。
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