牡蠣過(guò)敏原Crag1克隆表達(dá)及其抗原性改良.pdf

1、背景：
　　牡蠣，軟體動(dòng)物類(lèi)中最受歡迎的食物，在中國(guó)、日本和世界其他沿海國(guó)家都是十分重要的海鮮食品和保健食品。但它同時(shí)是過(guò)敏性食品之一，牡蠣的食用安全性令人擔(dān)憂(yōu)。因此開(kāi)展對(duì)牡蠣過(guò)敏原的研究顯得極具現(xiàn)實(shí)意義。針對(duì)現(xiàn)在的廣泛應(yīng)用特異性免疫治療食物過(guò)敏的現(xiàn)狀，獲得高純度、高免疫原性、低變應(yīng)原性的標(biāo)準(zhǔn)化過(guò)敏原制劑勢(shì)在必行。所以應(yīng)用體外重組技術(shù)，以其獲得高純度的牡蠣過(guò)敏原蛋白；并通過(guò)基因突變高抗原性位點(diǎn)的方法，獲得低變應(yīng)原性但生物活性不變的

2、牡蠣過(guò)敏原蛋白，為治療牡蠣過(guò)敏癥開(kāi)辟一條道路。
　　目的：
　　本課題以牡蠣過(guò)敏原Cra g1為研究對(duì)象，體外重組其過(guò)敏原，并構(gòu)建抗原性弱化的重組Cra g1蛋白，為牡蠣食物過(guò)敏反應(yīng)疾病的診斷、制備單克隆抗體和進(jìn)一步研制脫敏試劑奠定了良好的基礎(chǔ)，對(duì)未來(lái)開(kāi)發(fā)生產(chǎn)無(wú)過(guò)敏性的牡蠣相關(guān)食品具有指導(dǎo)作用。
　　方法：
　　通過(guò)蛋白信息庫(kù)（Uniprot和Allergome）確定擬重組的牡蠣過(guò)敏原Cra g1的氨基酸和核酸序

3、列。對(duì)Cra g1基因序列進(jìn)行優(yōu)化后，體外重組Cra g1基因。構(gòu)建Cra g1蛋白的原核表達(dá)系統(tǒng)，通過(guò)親和層析法純化得到Cra g1蛋白，并進(jìn)行免疫印跡鑒定。后續(xù)使用NetMHC-П在線(xiàn)預(yù)測(cè)網(wǎng)站分析出優(yōu)勢(shì)T細(xì)胞抗原表位，對(duì)編碼優(yōu)勢(shì)表位的基因進(jìn)行定點(diǎn)突變，使表位的抗原值降低，從而獲得低過(guò)敏原性Cra g1蛋白并通過(guò)免疫印跡鑒定。
　　結(jié)果：
　?。?）得到利于表達(dá)的Crag1基因序列。
　?。?）Cra g1蛋白在大腸