牡蠣過敏原Crag1克隆表達及其抗原性改良.pdf

1、背景：
　　牡蠣，軟體動物類中最受歡迎的食物，在中國、日本和世界其他沿海國家都是十分重要的海鮮食品和保健食品。但它同時是過敏性食品之一，牡蠣的食用安全性令人擔(dān)憂。因此開展對牡蠣過敏原的研究顯得極具現(xiàn)實意義。針對現(xiàn)在的廣泛應(yīng)用特異性免疫治療食物過敏的現(xiàn)狀，獲得高純度、高免疫原性、低變應(yīng)原性的標(biāo)準(zhǔn)化過敏原制劑勢在必行。所以應(yīng)用體外重組技術(shù)，以其獲得高純度的牡蠣過敏原蛋白；并通過基因突變高抗原性位點的方法，獲得低變應(yīng)原性但生物活性不變的

2、牡蠣過敏原蛋白，為治療牡蠣過敏癥開辟一條道路。
　　目的：
　　本課題以牡蠣過敏原Cra g1為研究對象，體外重組其過敏原，并構(gòu)建抗原性弱化的重組Cra g1蛋白，為牡蠣食物過敏反應(yīng)疾病的診斷、制備單克隆抗體和進一步研制脫敏試劑奠定了良好的基礎(chǔ)，對未來開發(fā)生產(chǎn)無過敏性的牡蠣相關(guān)食品具有指導(dǎo)作用。
　　方法：
　　通過蛋白信息庫（Uniprot和Allergome）確定擬重組的牡蠣過敏原Cra g1的氨基酸和核酸序

3、列。對Cra g1基因序列進行優(yōu)化后，體外重組Cra g1基因。構(gòu)建Cra g1蛋白的原核表達系統(tǒng)，通過親和層析法純化得到Cra g1蛋白，并進行免疫印跡鑒定。后續(xù)使用NetMHC-П在線預(yù)測網(wǎng)站分析出優(yōu)勢T細(xì)胞抗原表位，對編碼優(yōu)勢表位的基因進行定點突變，使表位的抗原值降低，從而獲得低過敏原性Cra g1蛋白并通過免疫印跡鑒定。
　　結(jié)果：
　?。?）得到利于表達的Crag1基因序列。
　?。?）Cra g1蛋白在大腸