無患子皂甙對(duì)瘤胃發(fā)酵、甲烷產(chǎn)量以及瘤胃微生態(tài)的影響.pdf

1、在反芻動(dòng)物瘤胃代謝過程中，大約有2％-15％的飼料能量以甲烷的形式被損失掉。而甲烷是僅次于CO2的第二大溫室氣體。反芻動(dòng)物甲烷的排放不僅影響環(huán)境，而且引起飼料能量的損失，因此減少反芻動(dòng)物的甲烷排放越來越受到社會(huì)關(guān)注。本試驗(yàn)以無患子為試驗(yàn)材料，研究無患子皂甙(SAD)對(duì)瘤胃發(fā)酵及甲烷產(chǎn)量的影響;利用熒光定量PCR技術(shù)分析檢測(cè)瘤胃主要菌群的變化;并進(jìn)一步以變性梯度凝膠電泳(DGGE)研究瘤胃原蟲和甲烷菌的區(qū)系結(jié)構(gòu)和種群變化，初步探討SAD降

2、低甲烷排放的微生物學(xué)機(jī)制。
　　 試驗(yàn)一無患子皂甙對(duì)瘤胃發(fā)酵及甲烷產(chǎn)量的影響
　　 試驗(yàn)研究了SAD對(duì)瘤胃發(fā)酵及甲烷產(chǎn)量的影響。試驗(yàn)以玉米粉、羊草粉(50:50，w/w)為底物，分別添加茶皂素(TS，95％)、購買的無患子皂甙粉(SADC，75％)和無患子提取物（SADE，80％），其中TS組添加量為底物量1.5％，各處理組保持皂甙量一致。通過Mauricio的RTP體外培養(yǎng)法，分別測(cè)定培養(yǎng)12h、24h后各組培養(yǎng)液的產(chǎn)

3、氣量和發(fā)酵氣體中的甲烷含量以及培養(yǎng)24h后培養(yǎng)液的pH值、VFAs濃度、NH3-N濃度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)12h，各處理組均提高產(chǎn)氣量，甲烷產(chǎn)量顯著減少（P＜0.05）。培養(yǎng)24h，均提高產(chǎn)氣量，甲烷產(chǎn)量顯著降低(P＜0.05)，分別降低25.3％、26.5％和25.5％;對(duì)pH值影響差異不顯著，各處理組總VFAs顯著提高（P＜0.05），乙酸、丙酸濃度增加、丁酸濃度降低，其中SADC組乙酸、丙酸濃度顯著增加(P＜0.05)，各處理組NH3-

4、N濃度顯著降低(P＜0.05)。本結(jié)果顯示，SAD可促進(jìn)瘤胃發(fā)酵，并抑制甲烷產(chǎn)生。
　　 試驗(yàn)二無患子皂甙對(duì)瘤胃微生態(tài)的影響
　　 取體外試驗(yàn)的瘤胃發(fā)酵液樣品1mL，以RBB+C法提取基因組DNA，采用熒光定量PCR(RT-PCR)方法測(cè)定瘤胃甲烷菌、原蟲、真菌、白色瘤胃球菌、黃色瘤胃球菌、產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌、溶纖維丁酸弧菌相對(duì)于瘤胃總細(xì)菌16S rDNA的量;以變性梯度凝膠電泳研究瘤胃總菌區(qū)系，瘤胃原蟲和甲烷菌的區(qū)系變化

5、。結(jié)果顯示甲烷菌相對(duì)于總細(xì)菌16S rDNA的數(shù)量，各處理組較對(duì)照組下降，但差異不顯著(P＞0.05)。原蟲相對(duì)于總細(xì)菌16S rDNA的數(shù)量，各處理組原蟲數(shù)量顯著減少（P＜0.05），其中SADC組和SADE組極顯著減少（P＜0.01）。另外體外發(fā)酵試驗(yàn)中各處理組原蟲數(shù)均顯著降低（P＜0.05）。TS組的真菌數(shù)量較對(duì)照組減少，SADC組和SADE組則增加，但差異均不顯著（P＞0.05）。各處理組的白色瘤胃球菌較對(duì)照組提高，黃色瘤胃球菌

6、相較對(duì)照組降低，但差異均不顯著(P＞0.05)。各處理組的產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌較對(duì)照組極顯著降低(P＜0.01)，溶纖維丁酸弧菌顯著提高(P＜0.05)。結(jié)果表明，SAD可以顯著抑制原蟲生長(zhǎng)，但對(duì)甲烷菌的相對(duì)數(shù)量沒有明顯影響;SAD對(duì)真菌、白色瘤胃球菌、黃色瘤胃球菌沒有不良作用，但顯著抑制了產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌的生長(zhǎng)，顯著促進(jìn)了溶纖維丁酸弧菌的生長(zhǎng);SAD對(duì)細(xì)菌基本沒有影響，而改變了原蟲和甲烷菌區(qū)系。
　　 綜上所述，SAD可以抑殺原蟲