馬血中SOD和凝血酶的提取及膜濃縮工藝研究.pdf

1、本文以馬血為原料,在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,通過(guò)響應(yīng)面法和正交分析法分別優(yōu)化馬血中SOD超聲波提取及熱變性純化條件;主要研究不同截留分子量的RC超濾膜通量和膜濃縮的SOD和凝血酶比活力之間的關(guān)系,從而選出合適的膜,在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步考察馬血SOD、凝血酶原和凝血酶濃縮過(guò)程中料液溫度、操作壓力、進(jìn)料流速及濃縮倍數(shù)對(duì)膜通量的影響,并確定最佳膜濃縮工藝參數(shù)。此外,在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,通過(guò)正交分析法優(yōu)化超濾膜清洗條件,從而確定最優(yōu)膜清洗工藝參數(shù)。

2、最后再用單因素實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面法優(yōu)化馬血凝血酶原激活條件,進(jìn)而確定最優(yōu)激活條件。
　　在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)面法優(yōu)化馬血SOD超聲波提取工藝條件并采用正交分析方法得到最佳熱變性純化工藝參數(shù)。確定馬血中SOD的最優(yōu)提取工藝條件為:超聲時(shí)間15min、超聲功率220W、超聲溫度31℃,在此條件下SOD比活力可達(dá)77.5U/mg;最佳熱變性純化工藝條件為:熱變時(shí)間為20min、熱變溫度為50℃、Cu2+添加量為2.5％,該條件下SO

3、D比活力為668.5U/mg。
　　通過(guò)使用三種不同截留分子量的RC超濾膜對(duì)馬血SOD的膜通量及比活力進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn),得到:截留分子量為10kDa的RC超濾膜是濃縮SOD較理想的膜。
　　通過(guò)考察幾種濃縮工藝參數(shù)對(duì)馬血SOD膜濃縮的影響,確定最佳濃縮條件:料液溫度為20℃、操作壓力為0.20MPa、進(jìn)料流速為53.50m/s、濃縮倍數(shù)為2倍。單因素和正交試驗(yàn)結(jié)果表明,在膜濃縮過(guò)程中,污染物為SOD粗酶液時(shí),其最優(yōu)清洗條件為:清

4、洗劑為2%檸檬酸和0.3%NaOH、清洗時(shí)間為40min、清洗溫度為35℃,在此條件下膜通量恢復(fù)率達(dá)到94.12%。
　　通過(guò)膜通量和凝血酶比活力對(duì)比實(shí)驗(yàn),確定適用于凝血酶原和凝血酶液濃縮的膜分別為截留分子量為50kDa和截留分子量為30kDa的RC超濾膜。
　　通過(guò)研究幾種濃縮工藝參數(shù)對(duì)膜濃縮的影響,確定馬血凝血酶原提取液的最佳膜濃縮條件:料液溫度為5℃、操作壓力為0.15MPa、進(jìn)料流速為35.67m/s、濃縮倍數(shù)為3倍

5、;凝血酶的最佳膜濃縮條件:料液溫度為6℃、操作壓力為0.20MPa、進(jìn)料流速為71.34m/s、濃縮倍數(shù)為2倍。超濾膜清洗條件:首先使用蒸餾水在55℃條件下清洗50min,其次再用2%檸檬酸和0.3%NaOH為清洗劑,溫度在35℃條件下清洗40min。然后用2%HCl,30℃條件下清洗25min,最后用蒸餾水循環(huán)沖洗膜濃縮設(shè)備30min。
　　在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)面法優(yōu)化凝血酶原的激活條件,確定最優(yōu)激活條件:激活時(shí)間為2