高產(chǎn)脂肪酶菌株的篩選及酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf

1、脂肪酶是一種特殊的酯鍵水解酶，將脂肪分解為甘油脂和脂肪酸，它廣泛存在于動(dòng)植物和微生物中，也可通過化學(xué)合成獲得。以動(dòng)植物作為來源，這些資源受氣候、土壤等條件限制，此外動(dòng)植物種的脂肪酶分離提純更為復(fù)雜，而化學(xué)合成法的工藝復(fù)雜，且成本又較高，因此大部分酶都是微生物發(fā)酵法生產(chǎn)的。目前，產(chǎn)脂肪酶的微生物包括黑曲霉、白地霉、假單胞菌屬、毛霉、根霉、假絲酵母等，所產(chǎn)脂肪酶廣泛應(yīng)用于工業(yè)中，如洗滌業(yè)、食品行業(yè)、化學(xué)業(yè)、皮革業(yè)、造紙業(yè)等，近年來，脂肪酶在

2、醫(yī)藥業(yè)中也受到越來越多的關(guān)注。因此，獲得高產(chǎn)脂肪酶的菌株在醫(yī)藥業(yè)發(fā)展中存在巨大的潛在經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
　　 本研究從富含脂肪的環(huán)境中篩選獲得四株產(chǎn)脂肪酶的菌株，分別命名為菌株7、菌株3、菌株6、菌株5，并且通過滴定法對這四株菌株測定其各自的脂肪酶活性分別為3.00U/mL、1.70U/mL、1.70U/mL、4.00U/mL?？疾炀?的培養(yǎng)條件，結(jié)果顯示菌株7在溫度為25℃、pH值為7.0時(shí)的條件下，培養(yǎng)時(shí)間為72h所產(chǎn)酶的脂肪酶活

3、性最高。通過分子生物學(xué)的方法對該菌株的16SrRNA序列的分析，綜合其形態(tài)特征鑒定該菌株為假單胞菌屬，命名為菌株7。在分離純化脂肪酶之前對該菌株所產(chǎn)的脂肪酶粗品初步確定其等電點(diǎn)以及培養(yǎng)液的鹽析范圍，結(jié)果顯示該脂肪酶的等電點(diǎn)約為6.0，硫酸銨飽和度為40％-50％為最佳鹽析范圍。培養(yǎng)液上清經(jīng)過分級鹽析、脫鹽、DEAE-Sepharose Fast Flow層析、冷凍干燥、Sephadex G-75層析的分離純化方法，SDS-PAGE檢測結(jié)

4、果顯示該脂肪酶的分子量約為31ku。本研究還考察脂肪酶的最適作用條件及其穩(wěn)定性，結(jié)果顯示：脂肪酶的最適pH值約為9.0，最適作用溫度為40℃。脂肪酶有較寬的pH值和溫度穩(wěn)定范圍，在pH值為8.0，溫度為30～50℃的條件下更為穩(wěn)定。在終濃度為1 mmol/L時(shí)，Li+、Mg2+、Ba2+等金屬離子對脂肪酶活活性有明顯的促進(jìn)作用，吐溫80和Triton-100對酶活性起到促進(jìn)作用，而EDTA對酶活性存在明顯的抑制作用；乙酸乙酯對酶活存在抑