藥用生物催化劑的研究——菌株篩選及所產(chǎn)脂肪酶的應(yīng)用.pdf

1、脂肪酶是類脂化合物分解、合成和酯交環(huán)的催化劑，有機(jī)相中脂肪酶可以完成酯化、交換及轉(zhuǎn)酯等反應(yīng)，具有區(qū)域選擇性、立體選擇性、較高的穩(wěn)定性；抑制了水參與的副反應(yīng)，易于回收和利用；反應(yīng)完畢后產(chǎn)物的分離純化也比較容易，可以完成用化學(xué)法難以進(jìn)行的消旋化合物的拆分、不對(duì)稱合成等，使這一古老的酶種有著嶄新而廣闊的發(fā)展前景。由于酶在非水介質(zhì)中反應(yīng)具有水溶液介質(zhì)中酶促反應(yīng)無法比擬的優(yōu)點(diǎn)，人們對(duì)非水溶液的酶催化反應(yīng)研究也就越來越感興趣。脂肪酶在微生物界分布很

2、廣，但要尋求適于工業(yè)化生產(chǎn)的高產(chǎn)菌株卻非常困難，目前國(guó)內(nèi)需要的脂肪酶仍依賴進(jìn)口，為了推動(dòng)非水相酶催化在我國(guó)的研究與應(yīng)用，有必要開發(fā)出適于非水相作用的脂肪酶品種。 本論文涉及有機(jī)溶劑中有活性的脂肪酶產(chǎn)生菌株的選育，產(chǎn)酶條件及其在合成抗壞血酸脂肪酸酯和生物柴油中的應(yīng)用，主要結(jié)果如下： (1)通過添加10g/L的甲苯作為唯一碳源進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，然后以透明圈平板篩選法從土壤樣品中成功地篩選到了一株耐有機(jī)溶劑的產(chǎn)脂肪酶的酵母菌A213

3、，初步鑒定為耶羅威亞酵母。 (2)搖瓶實(shí)驗(yàn)表明，A213適宜的產(chǎn)酶培養(yǎng)基為(g/L)：酵母膏40，橄欖油10，MgSO4·7H2O1，KH2PO45，最佳培養(yǎng)條件為溫度27℃、初始pH6.5。脂肪酶活力最高可達(dá)67.8IU/mL；該酶最適作用溫度為40℃，最適作用pH為6.5，該酶在40℃，40min時(shí)酶活還可保持50％，pH5.5～8.5范圍內(nèi)穩(wěn)定。能直接在叔戊醇溶劑中催化合成L-抗壞血酸棕櫚酸酯。 (3)首次揭示了以

4、油脂為脂肪酸基供體跟L-抗壞血酸非水相酶促酯交換反應(yīng)合成L-抗壞血酸脂肪酸酯的可行性；并以氫化棕櫚油、大豆油和海狗油作為脂肪酸基供體跟L-抗壞血酸進(jìn)行酯交換反應(yīng)的介質(zhì)進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)在叔戊醇中用脂肪酶催化此反應(yīng)所得的產(chǎn)物濃度最高；同時(shí)對(duì)影響合成抗壞血酸脂肪酸酯的因素進(jìn)行了探討，確定了最適反應(yīng)條件：最佳的初始油脂底物濃度為200～600mmol/L，最適反應(yīng)時(shí)間可以定為9h。最佳反應(yīng)條件下產(chǎn)物濃度可達(dá)：43.51g/L。 (4)脂