光帽鱗傘菌絲體鋅多糖的制備及其抗衰老、降血脂、保護肝臟功效的研究.pdf

1、鋅是人體內(nèi)執(zhí)行生理功能最多的必須微量元素，與300多種酶的活性密切相關(guān)。機體鋅缺乏時會導致機體出現(xiàn)長發(fā)育遲緩、免疫功能紊亂、抗氧化防御功能紊亂、學習記憶能力下降和皮膚不完全角化等一系列臨床癥狀。據(jù)報道，世界上50％的人口面臨鋅攝入量不足的風險。食藥用真菌多糖是從食藥用真菌子實體、菌絲體或發(fā)酵液中提取的大分子活性物質(zhì)，具有提高免疫力、抗氧化、降血脂、降血糖、保護肝臟、抗腫瘤等多種生物學功效。
　　本研究以我國廣泛栽培的絲膜菌科（Co

2、rtinariaceae）食用真菌—光帽鱗傘(Pholiotanameko)SW-03為富鋅載體，通過液體深層發(fā)酵的途徑生產(chǎn)光帽鱗傘菌絲體鋅多糖(Myceliazinc polysaccharide，MZPS)，以期開發(fā)出兼具多糖和有機鋅兩者生物活性的新型補鋅產(chǎn)品及功能食品。
　　(1)運用原生質(zhì)體誘變育種技術(shù)篩選光帽鱗傘菌絲體多糖(Mycelia polysaccharide，MPS)高產(chǎn)菌株。實驗結(jié)果表明，用含2％蝸牛酶和2％

3、纖維素酶的復合酶，對培養(yǎng)7d的菌絲進行酶解，酶解溫度為30℃，酶解pH值為6.5，酶解時間為3h，穩(wěn)滲劑為0.6mol/L的硫酸鎂，在此條件下所得原生質(zhì)體的產(chǎn)量最高，為3.92×106個/mL。篩選出的16號誘變菌株（記為SW-03），MPS產(chǎn)量較出發(fā)菌株提高了33.43％，并具有遺傳穩(wěn)定性。
　　(2)研究了光帽鱗傘液體發(fā)酵過程中對鋅元素的富集能力和耐受能力。實驗結(jié)果表明，培養(yǎng)基中最優(yōu)鋅添加量為80mg/L，上罐發(fā)酵168h后，

4、富鋅菌絲體生物量為2.28g/L，MZPS產(chǎn)量為41.31 mg/L。并且，制備的MZPS中鋅元素含量為16.39±0.72mg/g，較MPS中的10.76±0.41mg/g有了顯著提高（P＜0.1）。
　　(3)運用Plackett-Burman實驗設計和響應面實驗設計對MZPS的提取工藝進行優(yōu)化。實驗結(jié)果表明，加水倍數(shù)為25.00，pH值為8.00，醇沉時間為22.00h是提取MZPS的最優(yōu)工藝條件。用優(yōu)化后的工藝條件提取光帽

5、鱗傘MZPS，MZPS的提取率為2.98％。
　　(4)采用DEAE-52纖維素陰離子交換柱層析和SephadexG-100葡聚糖凝膠柱層析對MZPS進行分離純化，得到三個多糖組分:MZPS-1a、MZPS-2a和MZPS-3a，其中MZPS-2a為MZPS的主要成分。高效凝膠滲透色譜法（High-performance gel permeationchromatography，HPGPC）的實驗結(jié)果表明，MZPS-2a為均一多糖

6、，重均分子量（Weight-average molecularweight，Mw）為1.36×104Da。傅立葉紅外光譜(Fouriertransform infrared spectroscopy, FT-IR)的分析結(jié)果表明MZPS-2a具有多糖的特征吸收峰。柱前衍生高效液相色譜（High performance liquid chromatography, HPLC）法的實驗結(jié)果表明MZPS-2a含有葡萄糖、甘露糖、葡萄糖醛酸、半

7、乳糖、半乳糖醛酸和阿拉伯糖，且摩爾比為172.59∶5.29∶4.61∶4.20∶1.01∶1.00。
　　(5)通過體外抗氧化實驗和體內(nèi)抗氧化實驗分析MZPS的抗衰老能力。體外抗氧化實驗表明，MZPS及其組分具備還原力和清除超氧陰離子自由基、羥基自由基和DPPH自由基的能力。并且，在MZPS的組分中，MZPS-2a的抗氧化能力最強，這可能與MZPS具備較低的分子量，較高的糖醛酸含量以及葡萄糖在單糖組成中所占比例較低的結(jié)構(gòu)特征相關(guān)

8、。體內(nèi)抗氧化實驗證明MZPS可以顯著提高衰老小鼠體內(nèi)超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）活性和總抗氧化能力(Total antioxidant capability，T-AOC)，降低脂質(zhì)過氧化物(Lipid peroxide，LPO)和丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量。特別是MZPS較MPS表現(xiàn)出了更強的降低LPO和MDA含量的能力，這可能與鋅的抗氧化功能有關(guān)。實驗結(jié)果說明，MZPS是

9、具有延緩衰老功效的天然抗氧化劑。
　　(6)通過建立高血脂癥小鼠模型，分析MZPS降血脂、保護肝臟的能力。實驗結(jié)果表明，MZPS可以顯著降低高脂血癥小鼠血清中的總膽固醇(Total cholesterol，TC)、甘油三酯(Triacylglycerols，TG)、低密度脂蛋白膽固醇(Low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C)和極低密度脂蛋白膽固醇(Very low-density lip

10、oprotein cholesterol，VLDL-C)水平，升高高密度脂蛋白膽固醇（High-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）水平，并且降低高脂血癥小鼠肝臟中的TC和TG水平。同時，小鼠血清和肝臟中的SOD活性和T-AOC水平顯著上升，LPO和MDA含量顯著下降。另外，形態(tài)學觀察表明MZPS可以減輕高脂血癥小鼠的肝臟損傷。實驗結(jié)果說明，MZPS具有降血脂，預防高脂飲食引起的非酒精性脂肪肝的功