干擾ATF5功能對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV3紫杉醇敏感性的影響及其作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　 1、研究紫杉醇(PTX)作用對(duì)人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3增殖的影響，檢測(cè)PTX作用細(xì)胞后人轉(zhuǎn)錄激活因子5(activating transcription factor5，ATF5)的表達(dá)情況;
　　 2、研究顯性負(fù)抑制干擾ATF5功能聯(lián)合PTX作用對(duì)人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3 PTX敏感性的影響，并探索其可能的分子機(jī)制。
　　 方法:
　　 1、實(shí)時(shí)定量PCR、Western blot檢測(cè)SK

2、OV3細(xì)胞中ATF5的表達(dá)情況;
　　 2、設(shè)立濃度梯度的PTX作用SKOV3細(xì)胞不同時(shí)間，WST-8法檢測(cè)PTX作用對(duì)細(xì)胞增殖的影響，并確定PTX作用細(xì)胞的IC50值;
　　 3、實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)70 nmol/L PTX作用SKOV3細(xì)胞24、48、72 h時(shí)ATF5的表達(dá)情況;
　　 4、顯性負(fù)抑制(Dominant-Negative，DN)干擾ATF5功能后，采用WST-8法、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)干擾ATF5

3、功能聯(lián)合PTX作用對(duì)SKOV3細(xì)胞增殖和凋亡的影響;
　　 5、實(shí)時(shí)定量PCR、Western blot檢測(cè)干擾ATF5功能后抗凋亡因子Bcl2的表達(dá)情況;
　　 6、整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，人急性視網(wǎng)膜色素上皮二倍體細(xì)胞（ARPE-19）作為對(duì)照細(xì)胞。
　　 結(jié)果:
　　 1、SKOV3、ARPE-19細(xì)胞中均有ATF5的表達(dá);
　　 2、WST-8結(jié)果顯示PTX對(duì)SKOV3、ARPE-19細(xì)胞生長(zhǎng)具有

4、明顯的抑制作用，呈劑量和時(shí)間依賴性(P＜0.05)，其48 h時(shí)對(duì)SKOV3、ARPE-19細(xì)胞的IC50值分別為56.5 nmol/L、84.7 nmol/L，選取中間值70 nmol/L作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)中的PTX作用濃度;
　　 3、實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示70 nmol/L PTX作用細(xì)胞后，ATF5 mRNA的表達(dá)明顯下降，呈時(shí)間依賴性(P＜0.05);
　　 4、顯性負(fù)抑制干擾ATF5功能后，WST-8、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)

5、果顯示干擾ATF5功能后明顯促進(jìn)了PTX誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖抑制和細(xì)胞凋亡(P＜0.05)，而且與ARPE-19細(xì)胞相比，對(duì)SKOV3細(xì)胞的效果更明顯(P＜0.05);
　　 5、干擾ATF5功能后，與相對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)空載體組比較，抗凋亡因子Bcl2的表達(dá)明顯下降(P＜0.05);而且與ARPE-19細(xì)胞相比， Bcl2表達(dá)在SKOV3細(xì)胞中的下降幅度更明顯。
　　 結(jié)論:
　　 1、ATF5在卵巢癌細(xì)胞株SKOV3中高表