干擾ATF5功能對卵巢癌細胞SKOV3紫杉醇敏感性的影響及其作用機制研究.pdf

1、目的:
　　 1、研究紫杉醇(PTX)作用對人卵巢癌細胞株SKOV3增殖的影響，檢測PTX作用細胞后人轉錄激活因子5(activating transcription factor5，ATF5)的表達情況;
　　 2、研究顯性負抑制干擾ATF5功能聯(lián)合PTX作用對人卵巢癌細胞株SKOV3 PTX敏感性的影響，并探索其可能的分子機制。
　　 方法:
　　 1、實時定量PCR、Western blot檢測SK

2、OV3細胞中ATF5的表達情況;
　　 2、設立濃度梯度的PTX作用SKOV3細胞不同時間，WST-8法檢測PTX作用對細胞增殖的影響，并確定PTX作用細胞的IC50值;
　　 3、實時定量PCR檢測70 nmol/L PTX作用SKOV3細胞24、48、72 h時ATF5的表達情況;
　　 4、顯性負抑制(Dominant-Negative，DN)干擾ATF5功能后，采用WST-8法、流式細胞術檢測干擾ATF5

3、功能聯(lián)合PTX作用對SKOV3細胞增殖和凋亡的影響;
　　 5、實時定量PCR、Western blot檢測干擾ATF5功能后抗凋亡因子Bcl2的表達情況;
　　 6、整個實驗過程中，人急性視網(wǎng)膜色素上皮二倍體細胞（ARPE-19）作為對照細胞。
　　 結果:
　　 1、SKOV3、ARPE-19細胞中均有ATF5的表達;
　　 2、WST-8結果顯示PTX對SKOV3、ARPE-19細胞生長具有

4、明顯的抑制作用，呈劑量和時間依賴性(P＜0.05)，其48 h時對SKOV3、ARPE-19細胞的IC50值分別為56.5 nmol/L、84.7 nmol/L，選取中間值70 nmol/L作為后續(xù)實驗中的PTX作用濃度;
　　 3、實時定量PCR結果顯示70 nmol/L PTX作用細胞后，ATF5 mRNA的表達明顯下降，呈時間依賴性(P＜0.05);
　　 4、顯性負抑制干擾ATF5功能后，WST-8、流式細胞術結

5、果顯示干擾ATF5功能后明顯促進了PTX誘導的細胞增殖抑制和細胞凋亡(P＜0.05)，而且與ARPE-19細胞相比，對SKOV3細胞的效果更明顯(P＜0.05);
　　 5、干擾ATF5功能后，與相對應時間點空載體組比較，抗凋亡因子Bcl2的表達明顯下降(P＜0.05);而且與ARPE-19細胞相比， Bcl2表達在SKOV3細胞中的下降幅度更明顯。
　　 結論:
　　 1、ATF5在卵巢癌細胞株SKOV3中高表