HGF基因轉(zhuǎn)染對兔高動力性肺動脈高壓影響的實驗研究.pdf

1、研究背景：高動力性肺動脈高壓是左向右分流型先天性心臟病常見的合并癥，嚴(yán)重影響先天性心臟病外科矯治手術(shù)的時機、成功率以及患者術(shù)后長期生存質(zhì)量。目前認(rèn)為，肺血管受到高血流沖擊時，由于機械應(yīng)力的刺激，出現(xiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，導(dǎo)致肺小動脈平滑肌過度增殖，從而造成管腔狹窄甚至閉鎖及進行性肺血管床減少，最終導(dǎo)致肺動脈高壓的形成。由于中、晚期肺動脈高壓患者肺血管中層的增厚和平滑肌纖維化，傳統(tǒng)的擴血管治療效果不理想。近年來，血管新生已成為多個研究領(lǐng)域內(nèi)的

2、熱點，尤其對于器官的缺血性病變，通過干預(yù)，增加新生血管(治療性血管新生)改善組織或器官的灌注，減少血流阻力而達(dá)到治療目的。肝細(xì)胞生長因子(HGF)是一種高效的血管生成因子，體內(nèi)應(yīng)用可以促進新生血管形成及側(cè)支循環(huán)的建立，同時還具有抗血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用，可防止新生血管的退化。HGF基因在治療肢體缺血和心肌缺血方面取得了顯著的療效，但應(yīng)用腺病毒載體介導(dǎo)肝細(xì)胞生長因子以治療肺動脈高壓尚未見有報道。有研究表明，通過向正常大鼠單側(cè)肺轉(zhuǎn)染攜帶HG

3、F基因的HJV-脂質(zhì)體，于7天后發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染側(cè)肺血管密度較對照側(cè)明顯升高，血流灌注率也明顯高于對照側(cè)，同時伴有該側(cè)肺動脈壓降低。據(jù)此，我們構(gòu)想：在肺動脈高壓病理情況下，導(dǎo)入外源性肝細(xì)胞細(xì)胞生長因子，通過其高效的促血管生成作用，誘導(dǎo)肺組織形成新生血管并建立有效側(cè)支循環(huán)以增加肺血管床的截面積，減少肺血流阻力，而達(dá)到降低肺動脈壓、減輕右心室負(fù)荷的目的。 目的：建立幼兔高動力性肺動脈高壓模型，經(jīng)氣管途徑以腺病毒為載體導(dǎo)入HGF基因(Ad-

4、HGF)，檢測目的基因表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物HGF對肺血管生成的促進作用，分析肺血管重構(gòu)和肺動脈壓力變化之間的關(guān)系，探討通過HGF基因轉(zhuǎn)染促進肺血管生成治療肺動脈高壓的可行性。 結(jié)論：1．氣管內(nèi)滴入法轉(zhuǎn)染，腺病毒載體直接到達(dá)肺組織，可提高基因治療的靶向性，同時治療基因的表達(dá)局限在肺組織內(nèi)，避免靜脈給藥造成的全身擴散。在有效劑量范圍內(nèi)，盡管可引起肺臟輕度、局限的炎性反應(yīng)，但無嚴(yán)重的病毒感染臨床癥狀，且炎性反應(yīng)是可逆的、自限性的，證實氣道給

5、藥轉(zhuǎn)基因治療肺臟疾病不失為相對安全的轉(zhuǎn)染途徑。 2．幼兔左頸總動脈與肺動脈主干吻合可形成類似動脈導(dǎo)管未閉的病理生理狀態(tài)，在保證吻合血管通暢的前提下，術(shù)后3個月，可形成與臨床先心病病理生理相接近的高動力性肺動脈高壓。 3．經(jīng)氣管內(nèi)滴入途徑轉(zhuǎn)染Ad-HGF，HGF可在肺組織局部高效表達(dá)，有較高的靶向性；腺病毒介導(dǎo)的HGF基因表達(dá)為一過性、階段性表達(dá)，持續(xù)時間不超過1月，對機體無長期危害；HGF轉(zhuǎn)染后，早期(2周內(nèi))以誘導(dǎo)