高壓氧對(duì)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞氧化損傷的研究.pdf

1、[目的]
　　通過(guò)體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞，觀察高壓氧(hyperbaric oxygen，HBO)治療對(duì)正常和缺氧狀態(tài)視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)細(xì)胞的細(xì)胞活性、線粒體DNA氧化損傷標(biāo)記物8-羥基鳥(niǎo)嘌呤（8-Hy-droxy deoxyguanosine，8-OHdG）及DNA氧化損傷修復(fù)標(biāo)記物8-羥基鳥(niǎo)嘌呤DNA糖苷酶(human8-OHdGuanine DNAglycos

2、ylasel，hOGG1)表達(dá)的影響。
　　[方法]
　　體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞ARPE-19，隨機(jī)分成對(duì)照組（正常對(duì)照組用DMEM/F12培養(yǎng)液，缺氧對(duì)照組用含濃度為200μmol/L CoC12的DMEM/F12培養(yǎng)液）和實(shí)驗(yàn)組（0.15MPa高壓氧處理組，0.2MPa高壓氧處理組，0.25MPa高壓氧處理組，缺氧+0.15MPa高壓氧處理組，缺氧+0.2MPa高壓氧處理組，缺氧+0.25MPa高壓氧處理組）。各實(shí)

3、驗(yàn)組在100％純氧下暴露60和90min，每隔24h暴露一次，共暴露2次。以3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽（3-（4，5-Dimethylthiazol-2-yl）-2，5-diphenyltetrazolium bromide，MTT）法檢測(cè)各組視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的增生活力;以免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistry，ICC)方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)8-OHdG的表達(dá)情況，以蛋白免疫印跡法(Western

4、Blot)檢測(cè)胞漿中hOGG1的表達(dá)情況。
　　[結(jié)果]
　　1.MTT法顯示:①正常狀態(tài)的人RPE細(xì)胞，與正常對(duì)照組相比，HBO干預(yù)0.15MPa組、0.20MPa組、0.25MPa組在所有觀察時(shí)間（60min、90min），RPE細(xì)胞的增殖活力均受到(P＜0.01)抑制;②缺氧狀態(tài)的人RPE細(xì)胞，與缺氧對(duì)照組相比，HBO干預(yù)0.15MPa組、0.20MPa組、0.25MPa組在所有觀察時(shí)間(60min、90min)，RP

5、E細(xì)胞的增殖活力均增強(qiáng)(P＜0.01)。
　　2.ICC法顯示:①正常狀態(tài)的人RPE細(xì)胞，與正常對(duì)照組相比，HBO干預(yù)0.15MPa組、0.20MPa組、0.25MPa組在所有觀察時(shí)間(60min、90min)，細(xì)胞內(nèi)8-OHdG表達(dá)量明顯增加(P＜0.01)，且隨著高壓氧壓力的增加而增多(P＜0.01)，各組8-OHdG表達(dá)量均隨著時(shí)間延長(zhǎng)呈增加的趨勢(shì);②缺氧狀態(tài)的人RPE細(xì)胞，與缺氧對(duì)照組相比，HBO干預(yù)0.15MPa組、0.

6、20MPa組、0.25MPa組在所有觀察時(shí)間(60min、90min)，細(xì)胞內(nèi)8-OHdG表達(dá)量明顯減少(P＜0.01);0.20MPa組與0.25MPa組相比，細(xì)胞內(nèi)8-OHdG表達(dá)量差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);各組8-OHdG表達(dá)量均隨著時(shí)間延長(zhǎng)呈減少的趨勢(shì)。③與正常對(duì)照組相比，缺氧對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)8-OHdG表達(dá)量明顯增加(P＜0.01)。
　　3.Western Blot法顯示:①正常狀態(tài)的人RPE細(xì)胞，與正常對(duì)照組相

7、比，HBO干預(yù)0.15MPa組、0.20MPa組、0.25MPa組在所有觀察時(shí)間(60min、90min)，細(xì)胞內(nèi)hOGG1表達(dá)量增加(P＜0.01)，但各組hOGG1表達(dá)量隨著高壓氧壓力的增加而減少(P＜0.01)，且隨著時(shí)間延長(zhǎng)呈減少的趨勢(shì);②缺氧狀態(tài)的人RPE細(xì)胞，與缺氧對(duì)照組相比，HBO干預(yù)0.15MPa組、0.20MPa組、0.25MPa組在所有觀察時(shí)間(60min、90min)，細(xì)胞內(nèi)hOGG1表達(dá)量明顯增加(P＜0.01)

8、，且隨著高壓氧壓力的增加而增加(P＜0.01)，各組hOGG1表達(dá)量隨著時(shí)間延長(zhǎng)呈增加的趨勢(shì)。③與正常對(duì)照組相比，缺氧對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)hOGG1表達(dá)量明顯增加(P＜0.01)。
　　[結(jié)論]
　　1.HBO治療可以抑制正常狀態(tài)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的增殖，但能促進(jìn)缺氧狀態(tài)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的增殖。
　　2.HBO治療可以增加正常狀態(tài)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞DNA氧化損傷，但能改善缺氧對(duì)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞造成的DNA氧化