

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:
以人視網(wǎng)膜色素上皮(human retinalpigment epithelium,hRPE)細胞為研究對象,研究不同光照時長對體外培養(yǎng)的hRPE細胞損傷凋亡的影響,篩選出最佳光照時長建造光損傷模型。研究hRPE細胞光損傷以及枸杞多糖干預(yù)防治后細胞中參與凋亡的蛋白分子表達量的變化,探討枸杞多糖對hRPE細胞光損傷保護可能的信號傳導(dǎo)途徑,為臨床應(yīng)用枸杞多糖治療年齡相關(guān)性黃斑變性以及視網(wǎng)膜光損傷性疾病提供理論依據(jù)。
2、 方法:
1、體外培養(yǎng)hRPE細胞(ARPE-19),用三基色冷光燈模擬自然光源,選取同一光照強度(2500±500)Lux,不同光照時長(2h,4h,6h)對細胞進行光損傷干預(yù),通過MTS細胞增殖與毒性檢測出不同光照時長對hRPE細胞活力的影響;流式細胞儀檢測出不同光照時長對hRPE細胞凋亡的影響,篩選出建造光損傷模型的最佳光照時長。
2、制備高低安全濃度的枸杞多糖培養(yǎng)基,光照前1h孵育體外培養(yǎng)的hRPE細胞后進
3、行光照實驗,設(shè)置四個實驗分組:A組:空白對照組;B組:光損傷模型組;C組:0.01mg/ml枸杞多糖+光損傷組;D組:1mg/ml枸杞多糖+光損傷組。通過透射電子顯微鏡進行hRPE光損傷后細胞超微結(jié)構(gòu)的觀察及拍片;采用蛋白免疫印跡(Western blot)法檢測光損傷以及枸杞多糖的防治對體外培養(yǎng)的hRPE細胞內(nèi)細胞色素C(Cyt-C)、caspase-9及caspase-3蛋白表達的影響,來探討枸杞多糖對hRPE細胞光損傷保護的分子機
4、制,進一步探討hRPE細胞光損傷后細胞凋亡可能的信號傳導(dǎo)途徑。
結(jié)果:
1、MTS法檢測結(jié)果顯示,hRPE細胞活力率組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=16.075,P=0.000)。與空白對照相比,不同光照時長對細胞活力均有抑制作用,光照2h和光照4h組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),光照6h組細胞活力較光照4h組和光照2h組下降(P<0.05),光照時間越長,細胞損傷越嚴重。
2、不同時長光照結(jié)束后,經(jīng)A
5、nnexin-VFITC/PI雙染法檢測結(jié)果顯示,不同光照時長對細胞主要影響為凋亡。但由于實驗結(jié)果中晚期凋亡的細胞和壞死細胞區(qū)分意義不大,故針對早期凋亡率進行統(tǒng)計學(xué)分析。hRPE早期凋亡率組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=28.494,P=0.000)。不同時長光照組hRPE細胞的早期凋亡率均較空白對照組升高(P<0.05),光照4h早期凋亡率較光照2h早期凋亡率升高(P<0.05),光照6h早期凋亡率較光照4h早期凋亡率降低(P<0.05
6、)。光照4h組的早期凋亡率明顯高于其他組,同時保有較高的細胞活力。
3、透射電子顯微鏡結(jié)果顯示:正常hRPE細胞狀態(tài)良好,細胞形態(tài)大小不一,細胞膜上可見大量微絨毛,胞膜完整,細胞核呈圓形或卵圓形,細胞基底部質(zhì)膜內(nèi)褶發(fā)達,胞質(zhì)內(nèi)有大量黑素顆粒。細胞內(nèi)可見吞噬體、大量的滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、發(fā)達的高爾基復(fù)合體、較多的線粒體和溶酶體、少量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞器。經(jīng)過光照的hRPE細胞明顯走向凋亡的形態(tài),電鏡下觀察到電鏡切片細胞數(shù)量明顯減少,可見
7、散在的細胞碎片。細胞膜上的微絨毛消失,細胞膜結(jié)構(gòu)完整無破裂,胞質(zhì)內(nèi)部細胞器變少,有大量的空泡。細胞核成波紋狀,核內(nèi)可見細胞核沿核膜內(nèi)側(cè)邊緣開始固縮、碎裂,核染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài)、邊集、丟失,可見凋亡小體。結(jié)果表明:經(jīng)過光照后hRPE細胞出現(xiàn)不同程度的損傷,甚至凋亡。
4、蛋白免疫印跡(Western-blot)法檢測hRPE細胞內(nèi)Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白因子的表達量,分別在14KD、46KD、31K
8、D處檢測到Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3的目的條帶,結(jié)果顯示:與空白對照組相比,單獨經(jīng)過光照的光損模型組細胞內(nèi)的Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白表達水平明顯上調(diào)(P<0.05);用枸杞多糖防治的兩個組與光損模型組相比有效的抑制了細胞內(nèi)Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表達,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05);其中高濃度枸杞多糖(1mg/ml)組可顯著抑制細胞內(nèi)Cyt-C、
9、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表達與空白對照組,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。以上結(jié)果表明枸杞多糖通過抑制hRPE細胞內(nèi)Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表達,達到保護hRPE細胞的目的。提示枸杞多糖可能是通過抑制線粒體信號傳導(dǎo)通路而發(fā)揮對hRPE細胞保護作用的。
結(jié)論:
本實驗從細胞、蛋白分子水平,研究hRPE細胞光損傷后細胞凋亡的信號傳導(dǎo)途徑,結(jié)果顯示:1、不同時長的光照對
10、hRPE細胞會有不同程度的損傷,其中給予4h時長光照后,hRPE損傷以早期凋亡為主,同時又保有較高的細胞活力,符合我們實驗所需要光損傷模型的建造條件。2、體外培養(yǎng)的hRPE細胞經(jīng)過光照損傷后不僅細胞微觀結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變而且上調(diào)了細胞內(nèi)的Cyt-C、Caspase-3、Caspase-9等蛋白因子的表達量,枸杞多糖通過抑制hRPE細胞內(nèi)Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表達,達到保護hRPE細胞的目的。這一保護作用可能
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 枸杞多糖對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞抗衰老的影響.pdf
- 枸杞多糖對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞的保護作用.pdf
- 褪黑激素對于視網(wǎng)膜色素上皮細胞線粒體途徑凋亡的保護作用.pdf
- EPO抑制人視網(wǎng)膜色素上皮細胞氧化損傷線粒體機制的探討.pdf
- 視網(wǎng)膜色素上皮細胞在有色光信號傳導(dǎo)中的作用.pdf
- 藍光照射致視網(wǎng)膜色素上皮細胞凋亡途徑的研究.pdf
- 瘦素對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞氧化損傷的研究.pdf
- 高糖對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞氧化損傷的研究.pdf
- 枸杞多糖對藍光誘導(dǎo)損傷的視網(wǎng)膜色素上皮細胞抗氧化作用機制的研究.pdf
- HSV-1感染對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞和角膜上皮細胞的影響.pdf
- 高壓氧對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞氧化損傷的研究.pdf
- 白藜蘆醇對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞遷移的影響.pdf
- 胰島素對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞氧化損傷的研究.pdf
- 不同波長光對體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細胞的影響.pdf
- 褪黑色素對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞氧化損傷保護作用的研究.pdf
- 骨髓間充質(zhì)干細胞對光損傷致視網(wǎng)膜色素上皮細胞凋亡的影響.pdf
- 胰島素對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞PEDF表達的影響.pdf
- 間斷高糖對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞分泌VEGF的影響.pdf
- 電場對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞作用的實驗研究.pdf
- 腎上腺素誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜色素上皮細胞凋亡的實驗研究.pdf
評論
0/150
提交評論