2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的
  TLRs是先天性免疫受體家族之一,近年研究發(fā)現(xiàn)通過其內(nèi)源性配體具有觸發(fā)炎癥和組織修復的作用,在腎小球疾病患者非選擇性蛋白尿中存在纖維蛋白原等TLR4內(nèi)源性配體,足細胞表面又表達TLR4,因而提出非選擇性蛋白尿中存在的TLR4內(nèi)源性配體能夠激活TLR4信號通路,引起炎癥因子釋放,導致足細胞損傷及腎小球進行性硬化。本研究將應(yīng)用免疫組化方法檢測阿霉素誘導的小鼠腎小球硬化模型腎組織中的TLR4、Fibrinogen、NF-KB、

2、MCP-1及TGF-β1的表達,探討TLR4在腎小球硬化機制中的作用及可能機制。
  材料與方法
  一、阿霉素腎病模型建立
  SPF級雄性BALB/c小鼠50只,體重20±2克,6-8周齡。隨機分為實驗組(40只),對照組(10只)。實驗組小鼠尾靜脈一次性注入阿霉素10mg/kg,對照組小鼠尾靜脈一次注射等量生理鹽水,以標準飼料飼養(yǎng),自由攝食及飲水。
  二、標本收集
  各組均于注射阿霉素前一天、注射

3、阿霉素第1周、2周、4周及6周用代謝籠收集24小時尿液;對照組于第6周,實驗組于收集尿液結(jié)束當天各取小鼠6只4%水合氯醛麻醉,下腔靜脈采血,用于血清白蛋白、膽固醇、甘油三酯及尿素氮、肌酐的測定;剖腹取腎,留取腎組織標本,用于光鏡、電鏡及免疫組化檢查。
  三、檢測指標
  采用柳氮磺酸比濁法檢測尿蛋白定量,應(yīng)用自動生化儀檢測血清白蛋白、膽固醇、甘油三酯及尿素氮、肌酐水平;腎組織進行HE、PAS染色及透色電鏡檢查;應(yīng)用免疫組化

4、法檢測腎組織中TLR4、Fibrinogen、NF-KB、MCP-1及TGF-β1的表達。
  結(jié)果
  一、尿蛋白及血生化指標
  實驗組尿蛋白從第1周開始增加,第2周達高峰,4周、6周與2周相比稍有下降,但與對照組相比均有顯著性差異(p<0.01,0.01);血清白蛋白(ALB)于第1周開始下降(p<0.01),2周達最低值,4周、6周較2周稍升高,但仍處低水平狀態(tài),與對照組相比有顯著統(tǒng)計學差異(p<0.01,0.

5、01);甘油三脂(TG)、膽固醇(ChoL)于第1周開始升高(p<0.01),第2周達高峰,第4、6周較第1、2周下降,但仍處于高水平狀態(tài)(p<0.01,0.01);尿素氮(BUN)于第1周開始升高,第2周達高峰,第4、6周較第1、2周稍有下降,但仍處于高水平狀態(tài)(p<0.01,0.01);肌酐(Cr)無顯著性升高。
  二、光鏡
  實驗組第1周腎小球無明顯變化,腎小管可見蛋白管型;第2周部分腎小球可見節(jié)段性硬化,腎小管蛋

6、白管型增多,較易見到;第4周、6周可見50%以上腎小球中出現(xiàn)節(jié)段性硬化,腎小管擴張明顯,可見大量蛋白管型及局部間質(zhì)纖維化;對照組腎小球及腎小管無變化。
  三、電鏡
  實驗組于第1周偶可見足突融合,第2周足突融合更廣泛,第4周、6周出現(xiàn)足突融合變形,體積變大,胞質(zhì)中微絲增多,并出現(xiàn)囊泡及包涵體,毛細血管袢閉塞,充血,大量紅細胞填塞,內(nèi)皮細胞孔消失,基底膜正常。對照組足突清晰完整,未見融合。
  四、TLR4、Fibr

7、inogen、NF-KB、MCP-1及TGF-β1的免疫組化染色結(jié)果
  正常對照組TLR4少量表達于腎小球足細胞的胞膜及胞漿。免疫組化半定量分析顯示,TLR4在阿霉素腎病不同組別中的平均光密度依次遞增。實驗組2周、4周、6周與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01);Fibrinogen在阿霉素腎病不同組別中的表達依次遞增,實驗組1周、2周、4周、6周與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義(均是P<0.01),實驗組之間比較也均有統(tǒng)

8、計學差異(均是P<0.01);NF-κB在阿霉素腎病不同組別中的表達逐漸增加,實驗組1周、2周、4周、6周與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義(均是P<0.01);MCP-1在阿霉素腎病的不同組別中表達依次遞增,實驗組1周、2周、4周、6周組與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05,P<0.05,P<0.01,P<0.01);TGF-β1在阿霉素腎病實驗組1周時與對照組相比表達無統(tǒng)計學差異(P>0.05),實驗組2周、4周、6周組與對照組

9、相比差異均有統(tǒng)計學意義(均是P<0.01)。
  結(jié)論
  1.單次鼠尾靜脈注射10mg/kg阿霉素可成功的誘導BALB/c小鼠局灶節(jié)段性腎小球硬化模型。
  2.我們用免疫組化染色的方法證實了小鼠腎小球足細胞上結(jié)構(gòu)性的表達TLR4。
  3.纖維蛋白原是TLR4的內(nèi)源性配體,在阿霉素腎病小鼠腎小球內(nèi)纖維蛋白原表達增高,與足細胞TLR4、NF-KB、MCP-1、TGF-β1的表達呈正相關(guān)關(guān)系,提示TLR4信號通路

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