IL-18-PE38重組免疫毒素及其治療實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎的研究.pdf

1、目的：在近年基礎(chǔ)免疫學(xué)研究進(jìn)展的啟發(fā)下,本課題選擇新近發(fā)現(xiàn)的活化T細(xì)胞的表面標(biāo)記IL-18受體(IL-18R)為靶點(diǎn),構(gòu)建重組免疫毒素IL-18-PE38的表達(dá)質(zhì)粒,并通過基因治療技術(shù)將其接種于EAE模型鼠體內(nèi),觀察實(shí)驗(yàn)動物EAE癥狀及體征的改善情況以及相關(guān)細(xì)胞因子的動態(tài)變化來評價其治療效果,并探討其抗自身免疫性疾病的作用機(jī)理.方法:(1)采用RT-PCR法從小鼠肝總RNA中擴(kuò)增mIL-18目的基因片段,將其連接到含PE38的原核表達(dá)載

2、體上,構(gòu)建成重組質(zhì)粒PRKL-IL18-PE38,經(jīng)酶切鑒定及測序確認(rèn)后,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,通過Western-blot測定重組蛋白的表達(dá).(2)將mIL-18與PE38融合基因定向克隆入真核表達(dá)載體pSecTag2B,構(gòu)建重組質(zhì)粒pSecTag2B-IL18-PE38.經(jīng)鑒定確認(rèn)后,用脂質(zhì)體包裹純化的重組表達(dá)質(zhì)粒,體外轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞株,通過免疫熒光法檢測重組蛋白的表達(dá),并利用轉(zhuǎn)染后細(xì)胞培養(yǎng)上清體外測定IL-18-PE38目的