實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎模型的建立及MMP-9的表達(dá).pdf

1、目的：
　　 1、建立實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎（EAE）模型。
　　 2、觀察EAE大鼠行為學(xué)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）病理學(xué)改變，檢測(cè)CNS中基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）的分布與表達(dá)。
　　 3、為EAE、多發(fā)性硬化（MS）的治療提供新的思路。
　　 方法：
　　 將雌性Wistar大鼠隨機(jī)分為模型組（EAE組）和對(duì)照組（CFA組）。給予EAE組大鼠四肢足墊皮內(nèi)注射誘導(dǎo)乳劑豚鼠脊髓勻漿-完全福氏

2、佐劑（GPSCH-CFA）0.4ml，同時(shí)左后肢足背皮下注射百日咳疫苗（BPV）0.2ml，制備大鼠EAE模型。給予CFA組注射等量的生理鹽水和完全福氏佐劑（NS+CFA）。對(duì)兩組大鼠分別進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，測(cè)量體重變化，并動(dòng)態(tài)觀察EAE組大鼠腦及脊髓組織的病理學(xué)變化及MMP-9的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1、行為學(xué)變化：EAE組大鼠在注射GPSCH-CFA后8-12天相繼發(fā)病，主要表現(xiàn)為雙后肢無(wú)力、癱瘓，尾部肌張力

3、減低、消失，大鼠以前肢朝前爬行時(shí)，劍突以下的身體部分著地，雙后肢癱瘓，拖拉在后，足跖面朝上，部分大鼠伴有大小便失禁的情況。發(fā)病后3-5天臨床表現(xiàn)達(dá)到高峰，嚴(yán)重者出現(xiàn)前肢肌張力降低、四肢癱瘓，處于瀕死狀態(tài)，發(fā)病后7天左右EAE癥狀開(kāi)始恢復(fù)，病情恢復(fù)較快。EAE組大鼠體重較CFA組明顯下降，神經(jīng)功能評(píng)分較CFA組明顯增高，最高評(píng)分為5分。CFA組大鼠均未出現(xiàn)EAE癥狀，一般情況同正常動(dòng)物，活動(dòng)、飲食正常，體重逐漸增加。
　　 2、病

4、理學(xué)變化：光鏡下所示，腦、脊髓實(shí)質(zhì)內(nèi)有大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，主要為淋巴細(xì)胞，以分布在小血管周圍為主，呈典型的“袖套”狀改變，以白質(zhì)和灰白交界處較為明顯。KB染色顯示發(fā)病高峰期腦及脊髓實(shí)質(zhì)內(nèi)小靜脈周圍白質(zhì)出現(xiàn)大片髓鞘脫失，恢復(fù)期可見(jiàn)髓鞘再生現(xiàn)象。Bodian染色顯示整個(gè)病程中軸索保留相對(duì)良好。免疫組化染色顯示EAE組大鼠發(fā)病早期腦、脊髓內(nèi)有大量MMP-9陽(yáng)性細(xì)胞浸潤(rùn)，典型的MMP-9陽(yáng)性細(xì)胞胞漿呈棕褐色，主要為淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞，發(fā)病14天

5、后陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)開(kāi)始減少，1月后未見(jiàn)明顯的MMP-9表達(dá)。電鏡下，EAE組大鼠腦、脊髓實(shí)質(zhì)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞線粒體腫脹，多見(jiàn)管腔狹窄閉鎖，出現(xiàn)髓樣小體，神經(jīng)細(xì)胞及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體腫脹，有髓神經(jīng)纖維軸索內(nèi)微絲微管稀疏，鞘膜扭曲或?qū)用娣蛛x。對(duì)照組未見(jiàn)明顯的組織病理學(xué)改變。
　　 結(jié)論：
　　 1、采用豚鼠脊髓勻漿-完全福氏佐劑（GPSCH-CFA），輔以百日咳疫苗（BPV）誘導(dǎo)Wistar大鼠，可以成功制備EAE模型