炎癥信號(hào)對(duì)腎小管上皮細(xì)胞PDZK1及其耦聯(lián)蛋白的表達(dá)調(diào)控.pdf

1、目的:
　　本研究旨在觀察炎癥信號(hào)對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)PDZK1及其耦聯(lián)蛋白基因轉(zhuǎn)錄水平影響，對(duì)PDZK1和ABCG2蛋白表達(dá)水平，對(duì)PDZK1蛋白亞細(xì)胞定位的影響，及探求調(diào)控的信號(hào)通路。
　　方法:
　　炎癥信號(hào)IL-1β、IL-18、IL-37、IL-10、TGF-β及IL-1β聯(lián)合IL-18或IL-37及IL-18聯(lián)合IL-37刺激HK-2細(xì)胞，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(Real-time PCR)檢測(cè)P

2、DZK1、 ABCG2、 SLC22A12(URAT1)、 SLC22A13、 SLC5A12、 SLC22A11、SLC17A1和SLC17A3 mRNA的表達(dá)水平，Western Blot檢測(cè)ABCG2、PDZK1蛋白表達(dá)水平，用細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)PDZK1表達(dá)情況及其亞細(xì)胞定位。加入抑制劑PDTC(NF-κB)或者Wortmanin(PI3K)后再加入炎癥信號(hào)刺激，Western Blot檢測(cè)HK-2細(xì)胞PDZK1和ABCG2蛋白表

3、達(dá)量的變化。
　　結(jié)果:
　　1.IL-1β抑制SLC17A1、SLC17A3、SLC22A13、SLC22A12、PDZK1、SLC22A11mRNA表達(dá)(P＜0.05)，IL-1β刺激引起SLC5A12和ABCG2 mRNA表達(dá)降低，但是差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IL-1β及IL-18或IL-37聯(lián)合刺激，SLC17A1、SLC17A3、SLC22A13、SLC22A12、PDZK1、SLC22A11 mRNA表達(dá)仍降低，與I

4、L-1β單獨(dú)刺激沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。TGF-β刺激引起SLC17A1、 SLC17A3、 PDZK1mRNA表達(dá)降低(P＜0.05)，它同樣引起SLC22A11、ABCG2mRNA表達(dá)下調(diào)，但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IL-18、IL-37、IL-10也對(duì)部分尿酸通道基因的mRNA水平有調(diào)節(jié)作用，但調(diào)節(jié)的分子數(shù)目和強(qiáng)度遠(yuǎn)不及IL-1β和TGF-β。2.IL-1β、TGF-β刺激引起PDZK1蛋白表達(dá)明顯下降， IL-18、IL-10、IL-37則

5、對(duì)PDZK1蛋白表達(dá)沒有明顯影響，IL-1和IL-18、IL-37聯(lián)合刺激也不會(huì)改變IL-1對(duì)PDZK1蛋白表達(dá)的抑制作用。Western Blot發(fā)現(xiàn)IL-1β促進(jìn)ABCG2蛋白表達(dá)，并且IL-1β同IL-37或IL-18聯(lián)合作用也促進(jìn)其表達(dá)，IL-37、TGF-β、IL-18、 IL-10作用不明顯。3.PDTC（NF-κB抑制劑）引起IL-1β、 IL-1β+IL-18、 IL-1β+IL-37刺激組PDZK1表達(dá)明顯上調(diào)，而IL

6、-37、IL-10刺激組PDZK1表達(dá)顯著下調(diào)，而IL-18、IL-18+IL-37刺激組和對(duì)照組相比輕微下調(diào);TGF-β刺激組變化不明顯。Wortmannin(PI3K/Akt抑制劑)對(duì)炎癥信號(hào)刺激PDZK1蛋白表達(dá)沒有明顯作用。PDTC使IL-1β+IL-18、IL-1β+IL-37、IL-18+IL-37刺激組ABCG2表達(dá)下調(diào)，而IL-18刺激組表達(dá)上調(diào)，對(duì)IL-1β、IL-37、IL-10和TGF-β刺激組沒變化;Wortma

7、nnin使IL-1β+IL-18、IL-1β+IL-37、IL-18+IL-37刺激組ABCG2表達(dá)上調(diào)，IL-18刺激組表達(dá)下調(diào)，對(duì)IL-1β、IL-37、IL-10和TGF-β刺激組沒變化。
　　結(jié)論:
　　IL-1β、TGF-β在多種尿酸通道基因mRNA和蛋白表達(dá)中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用，IL-1β同IL-18或IL-37聯(lián)合作用同IL-1β單獨(dú)作用結(jié)果一致，IL-18、IL-37、IL-10對(duì)少數(shù)尿酸通道基因mRNA有調(diào)節(jié)