KCNQ1OT1基因多態(tài)性與肝細胞肝癌易感性關聯(lián)研究及初步功能分析.pdf

1、目的：研究KCNQ1OT1(KCNQ1 overlapping transcript1)基因編碼區(qū)的一個四核苷酸重復序列多態(tài)(rs35622507)與中國人群肝細胞肝癌(HCC)易感性的關聯(lián),并利用基因型-表型關聯(lián)研究及生物信息學方法探討多態(tài)參與肝細胞肝癌發(fā)生的功能及意義。
　　方法：⑴運用生物信息學工具篩選出KCNQ1OT1基因編碼區(qū)的多態(tài),并從中選取一個具有潛在功能的短串聯(lián)重復序列(STR)多態(tài)基因座(rs35622507)作

2、為候選多態(tài);⑵采用病例對照研究方法(510HCC病例和1014正常對照),PCR擴增結合非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳技術對候選多態(tài)進行基因分型,Logistic回歸統(tǒng)計分析基因多態(tài)基因座與HCC的關聯(lián)性;⑶運用Realtime PCR研究四種肝癌細胞系(HepG2,Hep3B, SK-Hep-1,BEL-7704)中rs35622507多態(tài)與KCNQ1OT1以及細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑1C(CDKN1C)表達量的基因型-表型關聯(lián);⑷運用

3、生物信息學的方法預測rs35622507多態(tài)對KCNQ1OT1空間構象的影響。
　　結果：①基因分型結果顯示,位于KCNQ1OT1編碼區(qū)的rs35622507基因座具有較好的多態(tài)性,病例組和對照組中 rs35622507基因座的等位基因頻率分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。②調整性別、年齡、吸煙、飲酒、HBV感染等主要風險因素后,運用Logistic回歸分析的方法對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,統(tǒng)計結果顯示:攜帶

4、一個等位基因10的雜合子或者是不帶等位基因10的基因型個體相對于10-10純合子患HCC風險性明顯降低(OR=0.67,95％CI:0.53–0.86;OR=0.38,95％CI:0.21–0.69)。③Real-time RT-PCR結果顯示,STR基因型與KCNQ1OT1的表達有基因型表型相關性,在四個細胞系中KCNQ1OT1基因中不帶等位基因10的基因型在細胞系中的表達量分別明顯增高20.9和33.3倍。另外在三個肝癌細胞系中KC

5、NQ1OT1的表達量與抑癌基因CDKN1C的表達量呈負相關。④生物信息學預測結果提示,STR多態(tài)可能通過不同等位基因改變KCNQ1OT1的空間構象從而影響KCNQ1OT1和CDKN1C的表達進而參與HCC的發(fā)生。
　　結論：⑴中國人群中rs35622507多態(tài)與肝細胞肝癌易感性存在顯著關聯(lián);⑵肝癌細胞系中rs35622507多態(tài)與KCNQ1OT1以及CDKN1C的表達量之間存在顯著的基因型-表型關聯(lián);⑶rs35622507多態(tài)可能