β-TrCP基因多態(tài)與肝細胞肝癌易感性關聯(lián)研究及功能分析.pdf

1、目的:篩選出β-TrCP基因3'UTR區(qū)域內與肝細胞肝癌易感性關聯(lián)的基因多態(tài)位點,并初步探討功能性多態(tài)位點參與調節(jié)β-TrCP基因表達的分子機理。
　　 方法:(1)運用生物信息學方法篩選β-TrCP基因3’UTR區(qū)域內多態(tài)位點,篩選條件:位于人類已知miRNA結合靶點內且最低等位基因頻率大于0.3；(2)通過病例對照研究檢測篩選出的位點與肝細胞肝癌易感性是否存在關聯(lián)；(3)對存在顯著關聯(lián)位點,運用Real-time PCR法進

2、一步觀察該位點基因型與肝細胞肝癌組織中β-TrCP基因mRNA表達水平是否相關；(4)對功能性多態(tài)位點,聯(lián)合運用MiRanda和TargetScan等生物信息學軟件預測并分析其影響miRNA與靶基因結合的分子機理。
　　 結果:
　　 (1)生物信息學方法篩選出rs16405位點位于已知miRNA結合靶點內且具有較好的基因分布頻率,基因分型結果顯示病例組中rs16405位點插入(INS)和缺失(DEL)等位基因頻率分別為

3、0.379和0.621；正常組為0.305和0.695；
　　 (2)校正年齡、性別、吸煙、飲酒及HBV感染因素后,Logistic回歸分析結果顯示rs16405位點在病例組和對照組中等位基因頻率分布存在顯著差異(P<0.05),與INS等位基因相比,攜帶有DEL等位基因的個體患HCC風險明顯降低(OR=0.72,95％CI:0.56-0.92),進一步按基因型統(tǒng)計分析,結果顯示與INS／DEL基因型和INS／INS基因型相比,

4、基因型為DEL／DEL的個體患HCC風險率明顯降低；
　　 (3)Real-time PCR結果證實rs16405不同基因型與β-TrCP mRNA表達水平存在顯著關聯(lián)性(P<0.05),rs16405位點INS／INS純合子組肝癌組織的β-TrCP表達水平最高,分別是INS／DEL組的3.99倍,DEI／DEL組的7.04倍；
　　 (4)通過生物信息學預測,我們發(fā)現(xiàn)rs16405位點的INS等位基因能破壞miR-92

5、0與β-TrCP基因3’UTR結合,從而可能抑制了miR-920對β-TrCP基因的降解作用,提高了β-TrCP mRNA表達水平。
　　 結論:(1)通過病例對照研究,成功篩選出β-TrCP基因rs16405位點與肝癌易感性存在顯著關聯(lián)；(2)通過體內實驗證實了rs16405位點與β-TrCP mRNA水平顯著相關；(3)運用生物信息學工具,我們提出了一個rs16405調節(jié)β-TrCP表達的模型,即它可能通過影響miR-920