67LR促進(jìn)肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的： 層粘連蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)重要的成分之一。67 kD層粘連蛋白受體(67 kD laminin receptor，67LR)是層粘連蛋白的一個(gè)非整合素受體，與層粘連蛋白相互作用，調(diào)節(jié)腫瘤的增殖、粘附、血管形成，促進(jìn)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。本實(shí)驗(yàn)室前期發(fā)現(xiàn)67LR的高表達(dá)可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞的侵襲能力，本研究旨在探討67LR對(duì)轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達(dá)的影響，以闡明67LR促進(jìn)肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)

2、制。 方法： 采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染以及構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株來(lái)實(shí)現(xiàn)67LR的高表達(dá)，采用RNA干擾技術(shù)降低67LR的表達(dá)，抑制效果采用流式細(xì)胞術(shù)和半定量RT-PCR檢測(cè)；運(yùn)用半定量RT-PCR技術(shù)分析67LR對(duì)基因表達(dá)的影響，部分基因表達(dá)的變化通過(guò)熒光定量PCR驗(yàn)證；MMPs活性的變化通過(guò)明膠酶譜測(cè)定。 結(jié)果： 67LR高表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞株LR4，其MMP-2、MMP-9的表達(dá)比67LR低表達(dá)的LR6及對(duì)照組pcDNA-1

3、細(xì)胞明顯升高，明膠酶譜分析也揭示，LR4細(xì)胞分泌的MMP-2和MMP-9的活性明顯上升；瞬時(shí)轉(zhuǎn)染67LR重組質(zhì)粒的Huh-7細(xì)胞，其MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-4、Hpa、uPA、Cath- B及Cath-D的表達(dá)明顯升高，而TIMP-2、TIMP-3的表達(dá)明顯下降；在SMMC-7721細(xì)胞和Huh-7細(xì)胞中，67LR表達(dá)的下調(diào)可以抑制MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-4、Hpa、uPA、Cath-B、