胰腺星狀細(xì)胞(PSCs)激活過(guò)程中類(lèi)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)機(jī)制研究.pdf

1、背景：胰腺導(dǎo)管腺癌(PDAC)和慢性胰腺炎(CP)以間質(zhì)中大量纖維結(jié)締組織增生為其組織學(xué)特點(diǎn)，激活的胰腺星狀細(xì)胞(Pancreatic stellate cells，PSCs)則是參與間質(zhì)纖維化的主要細(xì)胞成分。然而，PSCs激活的機(jī)制現(xiàn)仍不明確。根據(jù)其激活的特點(diǎn)，我們提出假設(shè)，PSCs活化的核心事件是上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)。
　　目的：通過(guò)檢測(cè)PSCs激活前后的細(xì)胞功能、形態(tài)、基因表達(dá)方面的變化，闡明PSCs活化過(guò)程中是否存在類(lèi)

2、似EMT的過(guò)程，并探索其可能的分子機(jī)制。
　　方法：通過(guò)酶消化-密度梯度離心法從Sprague-Dawley大鼠體內(nèi)提取正常靜止態(tài)PSCs，原代分離的PSCs均經(jīng)過(guò)免疫熒光染色和免疫化學(xué)染色鑒定。本研究將原代分離后培養(yǎng)40h的細(xì)胞作為靜止態(tài)PSCs，分離后10d的細(xì)胞作為激活態(tài)PSCs，分別對(duì)兩組細(xì)胞進(jìn)行Transwell遷移實(shí)驗(yàn)和活細(xì)胞工作站檢測(cè)，來(lái)評(píng)估細(xì)胞功能改變。并通過(guò)qRT-PCR和Western blotting分別檢測(cè)

3、兩組細(xì)胞的EMT相關(guān)基因mRNA和蛋白水平表達(dá)變化。
　　結(jié)果：每1g大鼠胰腺組織，能夠獲得的PSCs約為:4×106-7×106個(gè)，經(jīng)臺(tái)酚藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)鑒定細(xì)胞存活率約為90％左右。原代分離48h內(nèi)的PSCs定義為靜止態(tài)PSCs，細(xì)胞體積小，外觀呈圓形或多邊形，胞內(nèi)含有豐富的脂滴，可在320nm波長(zhǎng)的激發(fā)光下有短暫的自發(fā)藍(lán)綠色熒光;超過(guò)48h，細(xì)胞逐漸激活，外形呈多觸角狀，胞內(nèi)脂滴逐漸減少直至消失。與靜止態(tài)PSCs相比，激活態(tài)PSC

4、s細(xì)胞遷移和運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)。同時(shí)，上皮標(biāo)記（如E-cadherin、BMP7和Desmoplakin）表達(dá)下降，伴隨間質(zhì)標(biāo)記（如N-cadherin、Vimentin、Fibronectin1、Collagen1α1和S100A4）表達(dá)上升，且EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Snail與Slug也有不同程度的上調(diào)。
　　結(jié)論：細(xì)胞遷移和運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)伴隨EMT相關(guān)基因表達(dá)改變，表明體外靜止態(tài)的大鼠PSCs活化為激活態(tài)的肌成纖維細(xì)胞樣PSCs這一過(guò)程