龍葵堿誘導(dǎo)的反應(yīng)性氧自由基抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　 以龍葵堿作為一種抑制腫瘤生長(zhǎng)的藥物，對(duì)肝癌細(xì)胞體外作用，通過運(yùn)用相應(yīng)的ROS(反應(yīng)性氧自由基)探針檢測(cè)肝癌細(xì)胞內(nèi)ROS含量，WesternBlot方法檢測(cè)凋亡和增殖相關(guān)蛋白的表達(dá)，觀察龍葵堿促進(jìn)肝癌細(xì)胞產(chǎn)生ROS，尤其是H2O2和OH-，并導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡的生物學(xué)過程，闡明龍葵堿誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　 方法：
　　 運(yùn)用各種不同細(xì)胞定位的ROS探針，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)熒光值，檢測(cè)肝

2、癌細(xì)胞內(nèi)ROS的含量，WesternBlot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白(ASK1、TBP-2)和增殖相關(guān)蛋白(TRX2)的含量和活性，并通過倒置顯微鏡觀察龍葵堿作用后肝癌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變，行研究組和對(duì)照組計(jì)數(shù)比較。
　　 結(jié)果：
　　 ROS探針DCFDA和DHR123檢測(cè)到了龍葵堿預(yù)處理之后的肝癌細(xì)胞胞漿和線粒體中均存在豐富的ROS(包括OH-，H2O2)，與空白對(duì)照相比均有顯著性差異(p<0.05)；而O-2特異性的探針DHE

3、和MITSOX，檢測(cè)龍葵堿預(yù)處理之后產(chǎn)生的ROS(即O-2)，與空白對(duì)照相比均無顯著性差異(p>0.05)；WesternBlot實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，龍葵堿上調(diào)了凋亡相關(guān)蛋白ASK1、TBP-2的表達(dá)和活性，而抑制了增殖相關(guān)蛋白TRX2的表達(dá)；計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，龍葵堿顯著抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，隨著龍葵堿濃度增加和作用時(shí)間延長(zhǎng)，肝癌細(xì)胞變圓、皺縮、漂浮并破碎，死亡細(xì)胞逐漸增加，存活細(xì)胞數(shù)量明顯減少。
　　 結(jié)論：
　　 (1)龍葵堿誘