高遷移率族蛋白B1刺激的調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞對調(diào)節(jié)性T細(xì)胞功能的影響.pdf

1、目的：高遷移率族蛋白B1(HMGBl)是廣泛存在于真核細(xì)胞內(nèi)的高度保守的非組蛋白染色體蛋白，可由巨噬細(xì)胞或單核細(xì)胞等主動分泌，或由壞死細(xì)胞被動釋放。從而作為一種炎癥晚期介質(zhì)參與膿毒癥等病理過程，介導(dǎo)膿毒癥和其他系統(tǒng)性炎癥的致死性效應(yīng)，研究其病理生理作用將有助于深化對膿毒癥發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識，并為免疫反應(yīng)的調(diào)控提供潛在的干預(yù)目標(biāo)。本試驗擬應(yīng)用HMGBl體外刺激小鼠脾臟樹突狀細(xì)胞(DC)的一個亞群--CD11low CD45RBhigh DC，

2、闡明HMGBl對CD11clow CD45RBhigh DC表面共刺激分子CD80、CD86及主要組織相容性復(fù)合物(MHC)-Ⅱ類分子表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討對調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化的影響。為初步明確HMGBl免疫功能奠定基礎(chǔ)，旨在為膿毒癥、多器官功能障礙綜合征的預(yù)防和治療提供新思路。 方法：(1)無菌分離正常雌性BABL/c小鼠脾臟CD11clow CD45RBhigh DC，在含10％胎牛血清的1640培養(yǎng)液中調(diào)整細(xì)胞濃度1×105

3、/孔后置于96孔培養(yǎng)板，分別用0.01μg/ml、0.1μg/ml、1.0μg/ml的HMGBl刺激獲取的CD11clow CD45RBhigh DC，在刺激后12、24、36小時三個不同時間點，單克隆熒光抗體染色，用流式細(xì)胞儀觀察HMGBl刺激與CD11clow CD45RBhigh DC表面共刺激分子CD80、CD86和MHC-Ⅱ類分子表達(dá)的時間-效應(yīng)關(guān)系及劑量-效應(yīng)關(guān)系。(2)經(jīng)0.01 μg/ml、0.1μg/ml、1.0μg/

4、mlHMGB1刺激24小時的CD11clow CD45RBhigh DC按1∶150的比例與CD4+T細(xì)胞混合培養(yǎng)24小時后，單克隆熒光抗體染色，用流式細(xì)胞儀監(jiān)測調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tr)的特征性分化群CD25的表達(dá)情況。 結(jié)果： (1)流式細(xì)胞儀監(jiān)測HMGB1對小鼠脾臟CD11clow CD45RBhigh DC表面CD80、CD86和MHC-Ⅱ類分子表達(dá)的影響：用0.1μg/ml的MHGB1刺激12、24、36小時，與正常對照組相

5、比，CD11clow CD45RBhigh DC表面共刺激分子CD80表達(dá)上調(diào)(P＜0.05或P＜0.01)；而CD86和MHC-Ⅱ表達(dá)下調(diào)(P＜0.05或P＜0.01)。0.01μg/ml、0.1μg/ml、1.0μg/ml 的HMGB1 刺激24 小時均可誘導(dǎo)CD11clowCD45RBhigh DC表面共刺激分子CD86和MHC-Ⅱ表達(dá)下調(diào)(P＜0.05或P＜0.01)。但CD80表達(dá)上調(diào)(P＜0.05或P＜0.01)。(2)與正

6、常對照組相比，隨HMGB1濃度的增加，CD25表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05或P＜0.01)。 結(jié)論：(1)HMGB1能誘導(dǎo)小鼠CD11clowCD45RBhigh DC表面共刺激分子CD86及MHC-Ⅱ分子表達(dá)減弱，同時CD80表達(dá)有所增強(qiáng)。影響CD11cbw CD45RBhigh DC成熟。(2)經(jīng)HMGBl刺激的CD11clowCD45RBhigh DC可影響CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的分化，總體趨勢是隨著HMGBl濃度的增加