姜黃素與卡鉑聯(lián)合用藥對(duì)鼠卵巢癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系的影響.pdf

1、目的
　　卵巢癌是婦科三大惡性腫瘤之一，其死亡率在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中居首位[1]。卵巢癌對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性是患者死亡的重要原因，查明其耐藥機(jī)制并尋找逆轉(zhuǎn)劑是解決這一問(wèn)題的有效手段。
　　前期的研究顯示，鉑類藥物的原發(fā)性耐藥可能與PI3K/Akt信號(hào)通路異常活化有關(guān)。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要條件，PI3K/Akt信號(hào)通路與人類多種腫瘤密切相關(guān)，在腫瘤細(xì)胞的增殖、存活、抵抗凋亡、血管發(fā)生、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及對(duì)放化

2、療抵抗中發(fā)揮了重要作用。Ras基因是一種原癌基因，在人類的大部分腫瘤細(xì)胞中存在Ras的突變?；罨腞as能直接結(jié)合并激活P13K的P110催化亞基，P13K活化后將PIP2轉(zhuǎn)化而生成第二信使PIP3，然后通過(guò)激活生存信號(hào)激酶PKB/AKT等靶蛋白來(lái)調(diào)控細(xì)胞生存。
　　目前有代表性的卵巢癌耐藥逆轉(zhuǎn)劑有維拉帕米、環(huán)孢菌素A、三苯氧胺等，但是具有較大的毒副作用，在應(yīng)用上受到了限制。姜黃素（Curcumin）是從中藥姜黃中提取的一種相對(duì)分

3、子質(zhì)量小的脂溶性多酚類色素，具有抗炎、抗氧化、抗癌、清除自由基、抗微生物以及對(duì)心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等多方面藥理作用[2]。大部分的研究證明姜黃素在抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、增生和浸潤(rùn)的過(guò)程中有多個(gè)作用靶點(diǎn)，進(jìn)一步闡明了其對(duì)腫瘤的治療作用。姜黃素幾乎無(wú)毒副作用，且來(lái)源廣，價(jià)格低，有著廣泛的應(yīng)用前景?？ㄣK是臨床常用的卵巢癌化療藥?？ㄣK的劑量限制毒性是骨髓抑制，特別是血小板減少。因此卡鉑與其他抗腫瘤藥物聯(lián)合化療卵巢癌具有一定優(yōu)勢(shì)。但是，對(duì)順鉑耐藥的

4、卵巢癌[3]，卡鉑很少奏效。
　　為明確卵巢癌耐藥機(jī)制以及各藥物作用在信號(hào)通路上的位置靶點(diǎn)，應(yīng)用具有明確基因型的鼠卵巢癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系T1（基因型:p53-/-，c-myc,K-ras），T2(基因型:p53-/-,c-myc,Akt)，T3(基因型:p53-/-,K-ras,Akt)。前期研究結(jié)果表明姜黃素與PI3K抑制劑LY294002聯(lián)合用藥可抑制卵巢癌細(xì)胞轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株T1、T2、T3的生長(zhǎng)，促進(jìn)凋亡，具有協(xié)同效應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)在前

5、期研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步觀察姜黃素與卡鉑單獨(dú)或聯(lián)合用藥對(duì)鼠卵巢癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系的影響，并探討姜黃素對(duì)鼠卵巢癌細(xì)胞系的抑制作用機(jī)制是否與K-ras及PI3K/Akt信號(hào)通路有關(guān)。
　　方法
　　體外試驗(yàn)培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株T1、T2、T3，至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，MTT比色分析法檢測(cè)卡鉑單用、卡鉑與姜黃素聯(lián)合用藥24小時(shí)對(duì)卵巢癌細(xì)胞系T1、T2、T3的細(xì)胞抑制率。實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)卡鉑單用、卡鉑與姜黃素聯(lián)合用藥24小時(shí)對(duì)T1、T2、T3細(xì)胞系的中

6、Kras、PI3K、Akt的mRNA表達(dá)水平。Westernblotting檢測(cè)卡鉑單用、卡鉑與姜黃素聯(lián)合用藥24小時(shí)對(duì)T1、T2、T3細(xì)胞系kras、p-PI3K、p-Akt的蛋白表達(dá)水平。SPSS統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　1、MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率，鼠卵巢癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系T1、T2、T3對(duì)卡鉑具有耐藥作用，姜黃素與各濃度卡鉑聯(lián)用顯著提高了其增殖抑制率，且對(duì)含有Akt的T2、T3作用更加明顯。
　　2、通

7、過(guò)RT-PCR檢測(cè)T1、T2、T3細(xì)胞的Kras、PI3K、Akt的mRNA表達(dá)量，卡鉑姜黃素聯(lián)用組的表達(dá)量低于卡鉑單用組。
　　3、通過(guò)Westernblot檢測(cè)T1、T2、T3細(xì)胞Kras、p-PI3K、p-Akt表達(dá)量，卡鉑姜黃素聯(lián)用組低于卡鉑單用組。
　　結(jié)論
　　1.鼠卵巢癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系T1、T2、T3對(duì)卡鉑具有耐藥性。
　　2.姜黃素可逆轉(zhuǎn)鼠卵巢癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系對(duì)卡鉑的耐藥性，且對(duì)含有Akt的T2、T3