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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
研究二烯丙基三硫?qū)侨饬黾?xì)胞的凋亡作用。
方法:
1.CCK-8法檢測(cè)在不同濃度的DATS作用下,骨肉瘤細(xì)胞系MG-63和U2OS的生長(zhǎng)抑制率。
2.Hoechst33342染色法觀察DATS作用下骨肉瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。
3.FCM方法檢測(cè)在不同濃度的DATS作用下,骨肉瘤細(xì)胞系MG-63和U2OS的凋亡率。
4.RT-PCR方法檢測(cè)在不同濃度的DATS作用下,Casp
2、ase-3在骨肉瘤細(xì)胞系U2OS內(nèi)核酸水平的表達(dá)。
5.Western-Blot方法檢測(cè)在不同濃度的DATS作用下,Caspase-3、-8、-9和Bax/Bcl-2在骨肉瘤細(xì)胞系MG-63和U2OS內(nèi)蛋白水平的表達(dá)。
結(jié)果:
1.CCK8方法檢測(cè)結(jié)果顯示,經(jīng)0μmol/L、25mol/L、50μmol/L、75μmol/L、100μmol/L的DATS培養(yǎng)基孵育骨肉瘤細(xì)胞MG-63和U2OS48小時(shí)后,隨
3、著DATS的濃度的增加,對(duì)骨肉瘤細(xì)胞MG-63和U2OS增殖的抑制率越來大。
2.Hoechst33342染色結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組(50μmol/L)細(xì)胞核深染,濃縮,形態(tài)不規(guī)則,形成凋亡小體。
3.FCM方法檢測(cè)結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組(25mol/L、50μmol/L、100μmol/L的DATS)細(xì)胞的凋亡率較對(duì)照組(0μmol/L的DATS)明顯增高,并且有一定的濃度依賴性。
4.RT-PCR方法檢測(cè)結(jié)果顯示,
4、實(shí)驗(yàn)組(25mol/L、50μmol/L、100μmol/L的DATS)細(xì)胞的凋亡率較對(duì)照組(0μmol/L的DATS)相比較, Caspase-3在核酸水平上表達(dá)增多,并且有一定的濃度依賴性。
5.Western-Blot方法檢測(cè)結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組(25mol/L、50μmol/L、100μmol/L的DATS)細(xì)胞的凋亡率較對(duì)照組(0μmol/L的DATS)相比較,Caspase-3、-8、-9和Bax在蛋白水平上表達(dá)增多,
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