添加不同營養(yǎng)素的腸內(nèi)營養(yǎng)對改善腦外傷大鼠腸黏膜屏障功能和多巴胺受體表達的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：（1）研究腦外傷大鼠腸黏膜多巴胺受體表達的變化，探討腸道多巴胺受體在腦外傷大鼠腸黏膜屏障功能損傷中的作用；（2）比較添加不同營養(yǎng)素的腸內(nèi)營養(yǎng)支持方式對腦外傷大鼠腸黏膜多巴胺受體表達的影響及與腸黏膜屏障功能的關(guān)系，為臨床危重癥患者營養(yǎng)支持提供客觀的理論依據(jù)。
　　方法：采用改進后的Feeney自由落體腦損傷裝置，造成大鼠中度腦損傷建立腦外傷大鼠模型。首先將大鼠隨機分為正常對照組、腦外傷組、多巴胺組、拮抗劑組，分別于腦外傷第3、

2、7天取腸黏膜組織、尿液、臟器組織等標本。通過測量大鼠的體重，用尿中乳果糖和甘露醇排泄率比值(L/M)測定腸黏膜的通透性，用HE染色法觀察大鼠腸黏膜組織形態(tài)學的改變，用臟器組織中大腸桿菌菌落數(shù)測定細菌易位情況，用免疫組化方法檢測腸黏膜多巴胺受體的表達，用熒光定量PCR和western－blotting法分別檢測大鼠腸黏膜多巴胺受體表達的mRNA和蛋白水平，以此觀察腦外傷大鼠腸黏膜屏障功能和多巴胺受體表達的變化。在前期研究基礎(chǔ)上，將腦外傷大

3、鼠隨機分為對照組、腸內(nèi)營養(yǎng)組、谷氨酰胺組、益生菌組、聯(lián)合組，給予營養(yǎng)支持。分別于腦外傷第3、7天留取標本，采用上述方法觀察添加不同營養(yǎng)素的腸內(nèi)營養(yǎng)對腦外傷大鼠腸黏膜屏障功能和多巴胺受體表達的影響。收集各組資料，主要采用均數(shù)±標準差、單因素方差分析、LSD-t檢驗、SNK-q檢驗等進行統(tǒng)計學分析。
　　結(jié)果：1．腦外傷大鼠腸黏膜屏障功能受損：（1）不同時間點各組大鼠尿中L/M比值存在差異（F=67.155，P<0.01；F=564.

4、713，P<0.01），腦外傷組、多巴胺組和拮抗劑組大鼠的L/M比值均高于對照組（P<0.01）；與腦外傷組相比，多巴胺組與之比較無差異（P>0.05），而拮抗劑組則較之有所降低（P<0.01）；與第3天比較，第7天對照組（t=1.152）、腦外傷組（t=0.878）和多巴胺組（t=0.780）的L/M比值無差異（P>0.05），拮抗劑組比值則下降（t=2.84，P<0.05）。（2）HE染色結(jié)果顯示：腦外傷組和多巴胺組大鼠在第3天，腸

5、黏膜絨毛完整性被破壞，絨毛間質(zhì)疏松、腸絨毛排列極不規(guī)則，絨毛上皮壞死脫落，上皮層與固有層可見分離；第7天，腸黏膜上皮出現(xiàn)變性萎縮，絨毛變矮，間距增寬。但拮抗劑組大鼠絨毛變化較腦外傷組和多巴胺組程度為輕，只有輕度水腫。（3）腦外傷組大鼠腸、肺、肝、脾、腎等臟器中均檢測出大腸桿菌，各組大鼠在腸、肝、脾、腎等臟器中的大腸桿菌的菌落數(shù)比較組間有差異（P<0.01）。
　　2．腦外傷大鼠腸黏膜多巴胺受體表達水平上調(diào)：（1）腦外傷組大鼠腸黏膜

6、上皮結(jié)構(gòu)破壞，可見大量的棕褐色陽性反應(yīng)產(chǎn)物，隨著時間的增加，棕褐色陽性反應(yīng)產(chǎn)物也有所增加；多巴胺組大鼠腸黏膜上皮結(jié)構(gòu)基本完整，但可見大量的棕褐色陽性反應(yīng)產(chǎn)物；拮抗劑組大鼠第3天腸黏膜上皮細胞可見大量的棕褐色陽性反應(yīng)產(chǎn)物，但第7天棕褐色陽性反應(yīng)產(chǎn)物有所減少。（2）各組大鼠腸黏膜DRD1和DRD2表達的mRNA水平的PCR檢測發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，腦外傷組、多巴胺組和拮抗劑組的DRD1和DRD2表達的mRNA水平均升高（P<0.01），與腦外

7、傷組相比，多巴胺組受體的表達mRNA水平無差異，拮抗劑組則較前兩組有所降低。WB檢測結(jié)果顯示，各組受體表達均較對照組上調(diào)，其中，腦外傷組和多巴胺組表達DRD1和DRD2的條帶亮度無明顯差別，拮抗劑組條帶亮度則有差異。
　　3．添加不同營養(yǎng)素的腸內(nèi)營養(yǎng)方式有助于改善腦外傷大鼠腸黏膜屏障功能：（1）腦外傷后各組大鼠體重均有不同程度的降低（P<0.05），但各組間大鼠體重存在差異（F=6.30，P<0.01），與對照組比較，添加不同營養(yǎng)

8、素的腸內(nèi)營養(yǎng)組大鼠的體重均有所增加（P<0.01）。（2）腦外傷第7天，各組大鼠腸黏膜L/M比值存在差異（F=432.472，P<0.01），添加了不同營養(yǎng)素的腸內(nèi)營養(yǎng)組大鼠腸黏膜L/M比值均較對照組有所降低，其中益生菌組大鼠L/M比值要低于其他營養(yǎng)組（P<0.05）。（3）HE染色結(jié)果顯示，添加了不同營養(yǎng)素的各組大鼠較腦外傷組的病理損傷均有不同程度的減輕。（4）腦外傷第7天各組大鼠腸、肺、肝、脾、腎等臟器中均檢測出大腸桿菌，在腸、肺、

9、脾、腎等臟器，各組大腸桿菌數(shù)比較組間有差異，均少于對照組（P<0.05），益生菌組和聯(lián)合組檢測出在腸道的菌落數(shù)要少于腸內(nèi)營養(yǎng)組和谷氨酰胺組（P<0.01）。
　　4．添加不同營養(yǎng)素的腸內(nèi)營養(yǎng)方式可使腸黏膜多巴胺受體表達水平下調(diào)：（1）腦外傷第7天，各營養(yǎng)組大鼠腸組織棕褐色陽性反應(yīng)產(chǎn)物有所減少。（2）各組大鼠腸黏膜DRD1和DRD2表達的mRNA水平的PCR檢測發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，各營養(yǎng)組的DRD1和DRD2表達的mRNA水平均下降

10、（P<0.01）；各營養(yǎng)組的DRD1表達mRNA水平無明顯差異；益生菌組和聯(lián)合組大鼠腸黏膜的DRD2表達mRNA水平較腸內(nèi)營養(yǎng)組和谷氨酰胺組有所下降（P<0.01）。WB檢測結(jié)果顯示，各組受體表達均較對照組下調(diào)，表達DRD1和DRD2的條帶亮度無明顯差別。
　　結(jié)論：（1）腦外傷可導致大鼠腸黏膜通透性明顯升高，腸黏膜上皮細胞受損、細胞間緊密連接增寬等組織形態(tài)學的改變，以及發(fā)生臟器組織細菌易位等現(xiàn)象，表明腦外傷大鼠腸黏膜屏障功能受損

11、。（2）腦外傷大鼠腸道多巴胺受體的表達水平增加，說明腦外傷大鼠腸黏膜屏障功能受損可能與腸道多巴胺受體表達水平的上調(diào)有關(guān)。（3）添加不同營養(yǎng)素的腸內(nèi)營養(yǎng)能夠減緩腦外傷大鼠體重的下降趨勢，阻止腦外傷大鼠腸黏膜通透性的增加，減輕腦外傷大鼠腸黏膜組織形態(tài)的損傷，對腦外傷大鼠腸黏膜屏障具有保護作用，有助于減少腸道細菌易位的發(fā)生。添加不同營養(yǎng)素的腸內(nèi)營養(yǎng)在減緩腦外傷大鼠體重下降趨勢以及維護腸黏膜屏障功能方面各有優(yōu)勢，這可能與不同營養(yǎng)素對改善腸黏膜屏