重組鼠IL-12腺病毒轉(zhuǎn)染KC對SMMC-7721人肝癌細(xì)胞的體內(nèi)外實驗研究.pdf

1、蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文重組鼠IL12腺病毒轉(zhuǎn)染KC對SMMC7721人肝癌細(xì)胞的體內(nèi)外實驗研究姓名：李志民申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)（普外）指導(dǎo)教師：吳浩榮20080401重組鼠IL12腺病毒轉(zhuǎn)染KC對SMMC7721人肝癌細(xì)胞的體內(nèi)外實驗研究中文摘要疫組化，檢測VEGFmRNA的表達(dá)及PCNA、Bcl2、CD34陽性率，觀察腫瘤細(xì)胞增殖情況及微血管密度(MVD)。結(jié)果：(1)每只SD大鼠可得到10““15x107個KC，細(xì)胞的存活率

2、在93％以上；ED2單抗染色鑒定KC純度可達(dá)95％。(2)重組腺病毒AdvmlL12和AdvEGFP經(jīng)擴增后效價分別約2O109pfu／ml和30x109pfu／ml；AdvmlL1250MOI轉(zhuǎn)染KC，24hELISA檢測上清液中IL12濃度為56429a：3124pg／ml，是對照組的10倍左右，并隨時間延長繼續(xù)升高；取相同滴度AdvEGFP50MOI轉(zhuǎn)染KC，24h熒光觀察轉(zhuǎn)染率達(dá)90％；MTT提示：效靶比5：l時，第4d實驗組(

3、KCAdVmlL12SMMC7721)肝癌細(xì)胞抑制率為5012％，而對照組(KCSMMC7721)僅為25％，兩者有顯著性差異；ELISA檢測：VEGF的表達(dá)量在實驗組呈下降趨勢，并●與時間呈負(fù)相關(guān)，與對照組比較差別明顯；FCM檢測：48h時，KCAdvmlL12上清組中SMMC7721人肝癌細(xì)胞組凋亡率達(dá)122％，較對照組明顯增加。(3)裸鼠體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn)實驗組(KCAdvmlL12)瘤體體積161841111113，對照組(NS)體積

4、63775mm3，兩者比較有統(tǒng)計學(xué)意義；實驗組脾臟指數(shù)及外周血免疫細(xì)胞數(shù)等較對照組均有所增加；腫瘤組織切片HE染色提示實驗組腫瘤細(xì)胞異型性減少、瘤組織中有明顯的淋巴細(xì)胞浸潤；對其腫瘤組織行RTPCR發(fā)現(xiàn)，VEGFmRNA在實驗組中的表達(dá)較對照組下調(diào)；腫瘤組織免疫組化提示：實驗組PCNA、Bcl2陽性細(xì)胞比率較對照組明顯減少、CD34染色標(biāo)記測定MVD較對照組相比也呈下降趨勢。結(jié)論：(1)采用Ⅳ型膠原酶、鏈霉蛋白酶E離體灌注消化，Nyco

5、denz密度梯度離心及選擇性貼壁法能夠得到一定數(shù)量級別的KC，其純度和活性能滿足進一步實驗要求。(2)AdvmlL12在體外能有效地轉(zhuǎn)染KC和表達(dá)IL12；KCAdvmlL12和SMMC7721人肝癌細(xì)胞共培養(yǎng)時能提高對肝癌細(xì)胞的抑制率、加速腫瘤細(xì)胞調(diào)亡。(3)瘤內(nèi)、瘤周注射KC。AdvmlL12能有效的抑制裸鼠肝癌移植瘤的發(fā)展、阻止瘤體微轉(zhuǎn)移，并能提高機體免疫力。關(guān)鍵詞：重組腺病毒，白細(xì)胞介素12，KC，SMMC7721作者：李志民指