富含脯氨酸的酪氨酸激酶在系統(tǒng)性紅斑狼瘡淋巴細(xì)胞中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：
　　 通過檢測(cè)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者淋巴細(xì)胞中富含脯氨酸的酪氨酸激酶（Proline-Rich Tyrosine Kinase 2，Pyk2）的表達(dá)水平，研究Pyk2在淋巴細(xì)胞增殖過程的作用，以及Pyk2對(duì)淋巴細(xì)胞中促進(jìn)B淋巴細(xì)胞增殖的蛋白信號(hào)分子B淋巴細(xì)胞刺激因子(B lymphocyte stimulator，Blys)的影響和在此過程中可能的作用通路，初步探討Pyk2在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病過程中的意義，為系統(tǒng)性

2、紅斑狼瘡發(fā)病機(jī)制的研究提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，為臨床用藥提供一定的理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1、抽取SLE患者活動(dòng)組、非活動(dòng)組及健康對(duì)照組清晨空腹靜脈血各20ml，采用密度梯度離心法，并用淋巴細(xì)胞分離液分離外周血淋巴細(xì)胞。
　　 2、采用免疫細(xì)胞化學(xué)法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法，分別從蛋白分子水平、mRNA水平檢測(cè)Pyk2在SLE患者和健康對(duì)照組成員外周血淋巴細(xì)胞(PBMCs)中的表達(dá)。
　　 3、在SLE

3、患者和健康對(duì)照組成員外周血淋巴細(xì)胞(PBMCs)中分別加入促淋巴細(xì)胞增殖劑（佛波醇乙酸酯，PMA）和Pyk2特異性抑制劑（TyrA9）后，用CCK-8(Cell Counting Kit-8)方法檢測(cè)PMA和TyrA9對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的影響。
　　 4、在SLE患者和健康對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞(PBMCs)中分別加入促淋巴細(xì)胞增殖劑（佛波醇乙酸酯，PMA）和Pyk2特異性抑制劑，用半定量PCR方法檢測(cè)淋巴細(xì)胞中小G蛋白(Rac1)及

4、B淋巴細(xì)胞刺激因子(Blys)的表達(dá)水平。
　　 5、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS13.0，各組總體上有無差別采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法分析，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、免疫細(xì)胞化學(xué)法測(cè)定活化的Pyk2(Tyr402)在SLE中PBMCs的表達(dá)：磷酸化的Pyk2在健康對(duì)照組PBMCs中有少量表達(dá)，SLE患者活動(dòng)組PB

5、MCs中Pyk2(Tyr402)的表達(dá)水平明顯高于SLE患者非活動(dòng)組和健康對(duì)照組，而SLE患者非活動(dòng)組PBMCs中Pyk2(Tyr402)的表達(dá)水平高于健康對(duì)照組。在PBMCs中Pyk2信號(hào)蛋白的表達(dá)和活化在SLE患者明顯高于健康對(duì)照組。
　　 2、Pyk2mRNA的表達(dá)：與對(duì)照組成員相比，SLE患者PBMCs中Pyk2的表達(dá)水平明顯升高。且SLE患者活動(dòng)組和非活動(dòng)組組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，SLE患者活動(dòng)組和健

6、康對(duì)照組組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，SLE非活動(dòng)組和健康對(duì)照組組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3、PMA及TyrA9對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的影響：PMA對(duì)于SLE患者及健康對(duì)照組PBMCs的增殖有促進(jìn)作用。應(yīng)用TyrA9后，SLE患者PBMCs的增殖受到抑制，而健康對(duì)照組成員PBMCs的表達(dá)水平無明顯變化。
　　 4、SLE患者淋巴細(xì)胞中Blys和Racl的表達(dá)水平明顯高于健康對(duì)照組。在三組PBM

7、Cs中加入PMA刺激后，SLE患者和健康對(duì)照組成員淋巴細(xì)胞中Blys和Rac1的表達(dá)水平均升高。而先應(yīng)用Pyk2特異性抑制劑阻斷Pyk2的活化后再加入PMA，SLE患者淋巴細(xì)胞中Blys和Rac1的表達(dá)無明顯升高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而對(duì)于健康對(duì)照組，應(yīng)用TyrA9阻斷Pyk2的活化后，PMA仍可刺激淋巴細(xì)胞的增殖，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。可見TyrA9的抑制作用可能對(duì)于SLE患者淋巴細(xì)胞有特異性。
　　 結(jié)論：
　　 1、Py

8、k2可能參與SLE的發(fā)生發(fā)展，并且與SLE的病情活動(dòng)性相關(guān)。
　　 2、Pyk2可能通過作用于PBMCs的表達(dá)而影響SLE的發(fā)展，而Pyk2的異常表達(dá)對(duì)SLE具有特異性。
　　 3、Rac1可能是Pyk2誘導(dǎo)SLE患者淋巴細(xì)胞增殖及活化的重要信號(hào)通路蛋白，Pyk2可通過誘導(dǎo)Rac1的表達(dá)而引起T淋巴細(xì)胞的異常增值和活化。
　　 4、Pyk2是PMA誘導(dǎo)SLE患者PBMCs增殖及促進(jìn)Blys表達(dá)和活化的一個(gè)關(guān)鍵信號(hào)