食品中喹諾酮類(lèi)抗菌藥的分析方法比較研究.pdf

1、喹諾酮類(lèi)(quinolones，QNs)藥物是一類(lèi)抗菌作用強(qiáng)，抗菌譜廣的人工合成抗菌藥。隨著QNs在家禽類(lèi)動(dòng)物中的大量使用，很多地方出現(xiàn)濫用該類(lèi)藥物的情況，使得ONs在動(dòng)物性食品中殘留的現(xiàn)象普遍存在。QNs在人體內(nèi)累積后能產(chǎn)生毒副作用，而低濃度的QNs殘留能導(dǎo)致病原微生物產(chǎn)生耐藥性，從而危害人類(lèi)健康。本研究建立了三種食品中喹諾酮類(lèi)藥物的分析方法，并對(duì)方法進(jìn)行比較，旨在建立切實(shí)可行的分析食品中多種QNs的方法，從而更好的監(jiān)控食品中QNs的

2、殘留，確保食品的安全性。 本實(shí)驗(yàn)首先對(duì)樣品的提取液、提取方式和凈化方法進(jìn)行研究。選擇了五種提取溶劑、三種提取方式和兩種凈化方法對(duì)喹諾酮的提取及凈化效果進(jìn)行比較。結(jié)果表明檸檬酸-磷酸鹽緩沖液(Mcllvaine)的提取率高，超聲提取的方式效果好，固相萃取(SPE)的凈化方法更有效。SPE的方法優(yōu)化結(jié)果：選擇Varian-Boud elut plexa固相萃取柱為凈化柱，采用3mL甲醇、3mL純水、3mL Mcllvaine緩沖液活

3、化，1mL5％甲醇水溶液淋洗，6mL甲醇洗脫目標(biāo)物質(zhì)。 本文建立了氣相色譜(GC-FID)和氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)分析方法的操作條件。酸性喹諾酮經(jīng)衍生化后用氣相色譜檢測(cè)，GC-FID檢測(cè)出萘啶酸(NAL)和氟甲喹(FLU)，檢出限是9.09μg/mL和11.54μg/mL，定量限是30.30μg/m和38.36μg/mL。GC-MS檢測(cè)出奧索利酸(OXO)、NAL和FLU，檢出限是23.08μg/mL、1.03μg/mL和1.1

4、8μg/mL，定量限是79.92μg/mL、3.42μg/mL和3.95μg/mL。GC-FID和GC-MS分析速度快、定性準(zhǔn)確，但樣品分析前需經(jīng)過(guò)衍生化，樣品處理相對(duì)復(fù)雜。本研究分析了三種酸性QNs，但這兩種方法適用范圍窄，且靈敏度低。因此該方法不適于檢測(cè)殘留在食品中微量的QNs類(lèi)藥物。 高效液相色譜(HPLC-FLD)方法比GC-FID和GC-MS方法在分析QNs類(lèi)藥物方面具有一定的優(yōu)勢(shì)。本文建立了同時(shí)檢測(cè)食品中13種喹諾酮

5、類(lèi)藥物的HPLC-FLD分析方法，并對(duì)色譜柱、流動(dòng)相體系、檢測(cè)波長(zhǎng)和其他色譜相關(guān)參數(shù)進(jìn)行了選擇優(yōu)化。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證：QNs的線性范圍是2.00～200.00ng/mL(其中達(dá)氟沙星在1.00～100.00ng/mL，恩諾沙星和莫西沙星在4.00～800.00ng/mL，OXO、NAL和FLU在2.00～400.00ng/mL)；QNs在各自的線性范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2范圍在0.9987～0.9999之間。最低檢出限(LOD

6、)在0.008～1.112/μg/kg，定量限(LOQ)在0.027～3.706μg/kg。在空白樣品中添加三個(gè)濃度水平的QNs標(biāo)準(zhǔn)溶液，13種QNs的回收率在72.76％～102.79％之間，日內(nèi)精密度在0.61％～9.99％之間，日間精密度在3.40％～6.09％。該方法操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，可同時(shí)分析多組分QNs的殘留。 超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC-MS/MS)比液相色譜具有更快的分析速度，能分析更多種QNs。本文

7、建立了同時(shí)檢測(cè)食品中22種喹諾酮類(lèi)藥物的UPLC-MS/MS分析方法。該方法對(duì)色譜柱、流動(dòng)相體系、色譜和質(zhì)譜相關(guān)參數(shù)進(jìn)行了選擇優(yōu)化。通過(guò)空白樣品基質(zhì)溶液加標(biāo)定量，有效地降低了基質(zhì)干擾的影響，回收率和重現(xiàn)性良好，QNs在其線性范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)為0.9851～0.9997之間，具有良好的線性關(guān)系。LOQ在0.00μg/kg～0.33g/kg，回收率在63.1％～94.6％之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.86％～13.12％之間。該方法靈敏度高，定性定

8、量準(zhǔn)確，分析速度快，可以對(duì)食品中多組分QNs的殘留進(jìn)行分析。 通過(guò)對(duì)GC-FID、GC/MS、HPLC-FID和UPLC-MS/MS方法的比較得出， GC-FID和GC-MS方法分析QNs的種類(lèi)少，檢出限高，靈敏度相對(duì)較低，不適合分析殘留在食品中微量的QNs類(lèi)藥物。UPLC-MS/MS的分析速度快，分離效率高，即使在液相色譜不能同時(shí)分析多種ONs的情況下，質(zhì)譜檢測(cè)器的多離子反應(yīng)監(jiān)控技術(shù)(MRM)也能解決這一問(wèn)題，而且還能同時(shí)分析