米非司酮聯(lián)合三氧化二砷對(duì)K562-ADM的逆轉(zhuǎn)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的： 探討米非司酮（MIF）聯(lián)合三氧化二砷（As2O3）對(duì)K562/ADM細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)作用及機(jī)制研究，為MIF聯(lián)合As2O3在難治性急性白血病中的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 采用甲基四氮唑鹽（MTT）法、AnnexinV/PI標(biāo)記法、RT-PCR法、分光光度法檢測(cè)經(jīng)MIF、As2O3、MIF聯(lián)合As2O3處理K562/ADM細(xì)胞72h前后的細(xì)胞增殖抑制作用、凋亡率、MRP表達(dá)水平、谷胱甘肽含量的變化。

2、 結(jié)果： 1、As2O3濃度在1.0umol/L時(shí)K562/ADM細(xì)胞未見(jiàn)明顯的抑制作用。在2.0umol/L抑制作用很?。?5.69±3.56％），當(dāng)濃度≥4umol/L其抑制作用明顯加強(qiáng)，并隨劑量加大作用加強(qiáng)，P<0.05。 2、MIF濃度在0-10umol/L對(duì)K562/ADM細(xì)胞未見(jiàn)明顯的增殖抑制作用，當(dāng)藥物濃度>10umol/L其抑制作用明顯加強(qiáng)，并隨劑量加大作用加強(qiáng)，P<0.05。 3、MIF、As2

3、O3及MIF聯(lián)合As2O3對(duì)K562/ADM細(xì)胞均有一定的逆轉(zhuǎn)耐藥作用，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為2.32，1.86，3.92倍，且ADM濃度在1.25-10.0范圍內(nèi)MIF聯(lián)合As2O3的逆轉(zhuǎn)作用較同濃度單用藥組作用明顯增強(qiáng)，P<0.05。 4、濃度為10umol/LMIF可以誘導(dǎo)K562/ADM細(xì)胞凋亡，其凋亡率為26.38±2.59％，2.0μmol/LAs2O3作用后，凋亡率為20.13±3.56％。MIF聯(lián)合As2O3共同作用于K

4、562/ADM細(xì)胞，凋亡率為：37.03±3.59％，與同濃度單用藥組，其誘導(dǎo)凋亡率明顯升高，P<0.05。 5、K562細(xì)胞中GSH含量為48.32±9.26g/L，K562/ADM細(xì)胞中為79.22±4.60g/L，耐藥細(xì)胞產(chǎn)生的GSH含量明顯高于敏感細(xì)胞，P<0.01。MIF單獨(dú)作用于耐藥細(xì)胞GSH含量為53.58±3.17g/L，聯(lián)合組作用于耐藥細(xì)胞GSH含量為53.08±6.02g/L，兩者之間相比，P>0.5，兩者與

5、耐藥細(xì)胞未加藥組相比，P<0.01。As2O3單獨(dú)作用于耐藥細(xì)胞GSH含量為77.05±4.54g/L，與耐藥細(xì)胞未加藥組相比，P>0.5，與聯(lián)合組相比，P<0.01。 6、K562/ADM細(xì)胞MRP基因的表達(dá)（0.98±0.11）明顯高于K562細(xì)胞（0.20±0.07），P<0.01。聯(lián)合組分別與MIF、As2O3單藥組相比，K562/ADM細(xì)胞MRPmRNA/β-Action比值明顯降低，P<0.01。三者與對(duì)照組相比，其

6、MRPmRNA/β-Action比值明顯降低，P<0.01。 結(jié)論： 1、As2O3濃度在0-2umol/L時(shí)，對(duì)K562/ADM細(xì)胞的增殖抑制不明顯，當(dāng)濃度≥4umol/L時(shí)對(duì)K562/ADM細(xì)胞有明顯抑制作用。 2、MIF濃度在0-10umol/L對(duì)K562/ADM細(xì)胞的增殖抑制不明顯，當(dāng)藥物濃度>10umol/L時(shí)對(duì)K562/ADM細(xì)胞有明顯抑制作用。 3、MIF和As2O3均能逆轉(zhuǎn)K562/ADM

7、細(xì)胞的耐藥性，二者聯(lián)合逆轉(zhuǎn)作用明顯增強(qiáng)。 4、MIF和As2O3均能誘導(dǎo)K562/ADM細(xì)胞凋亡，二者聯(lián)合誘導(dǎo)凋亡明顯增強(qiáng)。 5、K562/ADM細(xì)胞中GSH的含量明顯高于K562細(xì)胞，MIF可明顯降低K562/ADM細(xì)胞中GSH的含量。 6、K562/ADM細(xì)胞高表達(dá)MRP，MIF、As2O3均能抑制K562/ADM細(xì)胞中MRP表達(dá)，兩者聯(lián)合抑制效果更明顯。 7、MIF聯(lián)合As2O3應(yīng)用逆轉(zhuǎn)耐藥作用增強(qiáng)