腸球菌對氟喹諾酮類藥物的主動外排泵EmeA與耐藥關系的研究.pdf

1、目的:檢測腸球菌臨床分離株對3種氟喹諾酮類藥物(FQs)的敏感性,探討腸球菌對FQs產生耐藥性機制,研究主動外排泵EmeA在腸球菌的分布以及表達情況,為臨床合理使用抗菌藥物、控制腸球菌感染、研發(fā)新一代抗腸球菌藥物提供理論依據。
　　方法:隨時收集臨床送檢標本,按全國臨床檢驗操作規(guī)程[1]腸球菌檢測方法分離、培養(yǎng)、鑒定和藥敏試驗。用二倍瓊脂稀釋法測定臨床分離株腸球菌對3種氟喹諾酮類藥物的最低抑菌濃度(MIC),以及利血平對 MIC值

2、的影響。用聚合酶鏈反應(PCR)檢測編碼主動外排泵EmeA的基因emeA在腸球菌臨床株的分布,隨機挑選一emeA基因陽性菌株,將其PCR產物純化后測序,并對測序結果用Blast軟件進行同源性分析,探討腸球菌耐藥與emeA基因的關系。用逆轉錄(RT)-PCR測定emeA基因陽性菌株中emeA mRNA的表達水平。
　　結果:臨床標本中分離得到腸球菌共112株,其中糞腸球菌82株,占73.2％;屎腸球菌28株,占25.0%;鳥腸球菌、

3、堅韌腸球菌各1株,各占0.9%。腸球菌主要分離于尿液66株(58.9%)、痰液31株(24.1%)、傷口分泌物10株(11.6%),而其他標本僅有5株(5.4%)。
　　3種氟喹諾酮類藥物的抗腸球菌活性(MIC50,MIC90)從強到弱為:加替沙星分別為1mg/L,4mg/L、司帕沙星為2mg/L,8mg/L和左氧氟沙星為2mg/L,32mg/L。
　　112株臨床株腸球菌中47株為耐藥菌,占42.0%,其中10株對3種氟喹

4、諾酮均耐藥,占耐藥菌21.3%;24株對2種耐藥,占51.0%,13株對1種耐藥,占27.7%。應用利血平后,112株臨床分離株中40株為耐藥菌,占35.7%,其中7株對3種氟喹諾酮均耐藥,占耐藥菌17.5%;18株對2種耐藥,占45%;15株對1種耐藥,占37.5%。腸球菌對3種氟喹諾酮的耐藥率都降低:左氧氟沙星耐藥率從42.0%降至28.6%,司帕沙星耐藥率從33.0%降至24.1%,加替沙星耐藥率從9.9%降至5.3%。利血平使左

5、氧氟沙星MIC90從32mg/L降至16 mg/L;使司帕沙星MIC50從2mg/L降至1 mg/L,MIC90從8mg/L降至4 mg/L;使加替沙星MIC50從1mg/L降至0.5 mg/L,而MIC90從4mg/L降至1 mg/L。
　　用PCR法從112株腸球菌中擴增出57株emeA基因,emeA基因總陽性率50.9%。在對左氧氟沙星、司帕沙星和加替沙星耐藥的腸球菌中,檢出的emeA基因陽性率分別為67.9%、67.8%、

6、80.0%,敏感株的emeA基因陽性率分別為33.9%、32.1%、44.6%。將emeA片段測序結果與GenBank登錄序列在堿基和核苷酸水平進行同源性比較,同源性達到100%。用逆轉錄(RT)-PCR法并設置內參照,研究了它們腸球菌emeA基因的mRNA表達水平,耐藥組emeA基因mRNA表達量與內參灰度比值的平均值為1.485,而敏感組的灰度比值平均值為1.099(P<0.01)。
　　結論:
　　1.腸球菌在臨床感染

7、中,以糞腸球菌最常見,其次是屎腸球菌,其他種類腸球菌較少見;感染標本中,以尿液中分離率最高。
　　2.腸球菌臨床株對氟喹諾酮類藥物均有不同程度耐藥現象。氟喹諾酮類藥物對腸球菌的抑菌活性從強到弱依次為:加替沙星、司帕沙星、左氧氟沙星。
　　3.在112株腸球菌臨床分離標本中,基因emeA的總陽性率為50.9%;耐藥株的emeA基因陽性率高于敏感株,并且耐菌株的emeA基因mRNA表達水平顯著高于敏感株。
　　4.主動外排