腸球菌對(duì)氟喹諾酮類(lèi)藥物的主動(dòng)外排泵EmeA與耐藥關(guān)系的研究.pdf

1、目的:檢測(cè)腸球菌臨床分離株對(duì)3種氟喹諾酮類(lèi)藥物(FQs)的敏感性,探討腸球菌對(duì)FQs產(chǎn)生耐藥性機(jī)制,研究主動(dòng)外排泵EmeA在腸球菌的分布以及表達(dá)情況,為臨床合理使用抗菌藥物、控制腸球菌感染、研發(fā)新一代抗腸球菌藥物提供理論依據(jù)。
　　方法:隨時(shí)收集臨床送檢標(biāo)本,按全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[1]腸球菌檢測(cè)方法分離、培養(yǎng)、鑒定和藥敏試驗(yàn)。用二倍瓊脂稀釋法測(cè)定臨床分離株腸球菌對(duì)3種氟喹諾酮類(lèi)藥物的最低抑菌濃度(MIC),以及利血平對(duì) MIC值

2、的影響。用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)編碼主動(dòng)外排泵EmeA的基因emeA在腸球菌臨床株的分布,隨機(jī)挑選一emeA基因陽(yáng)性菌株,將其PCR產(chǎn)物純化后測(cè)序,并對(duì)測(cè)序結(jié)果用Blast軟件進(jìn)行同源性分析,探討腸球菌耐藥與emeA基因的關(guān)系。用逆轉(zhuǎn)錄(RT)-PCR測(cè)定emeA基因陽(yáng)性菌株中emeA mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:臨床標(biāo)本中分離得到腸球菌共112株,其中糞腸球菌82株,占73.2％;屎腸球菌28株,占25.0%;鳥(niǎo)腸球菌、

3、堅(jiān)韌腸球菌各1株,各占0.9%。腸球菌主要分離于尿液66株(58.9%)、痰液31株(24.1%)、傷口分泌物10株(11.6%),而其他標(biāo)本僅有5株(5.4%)。
　　3種氟喹諾酮類(lèi)藥物的抗腸球菌活性(MIC50,MIC90)從強(qiáng)到弱為:加替沙星分別為1mg/L,4mg/L、司帕沙星為2mg/L,8mg/L和左氧氟沙星為2mg/L,32mg/L。
　　112株臨床株腸球菌中47株為耐藥菌,占42.0%,其中10株對(duì)3種氟喹

4、諾酮均耐藥,占耐藥菌21.3%;24株對(duì)2種耐藥,占51.0%,13株對(duì)1種耐藥,占27.7%。應(yīng)用利血平后,112株臨床分離株中40株為耐藥菌,占35.7%,其中7株對(duì)3種氟喹諾酮均耐藥,占耐藥菌17.5%;18株對(duì)2種耐藥,占45%;15株對(duì)1種耐藥,占37.5%。腸球菌對(duì)3種氟喹諾酮的耐藥率都降低:左氧氟沙星耐藥率從42.0%降至28.6%,司帕沙星耐藥率從33.0%降至24.1%,加替沙星耐藥率從9.9%降至5.3%。利血平使左

5、氧氟沙星MIC90從32mg/L降至16 mg/L;使司帕沙星MIC50從2mg/L降至1 mg/L,MIC90從8mg/L降至4 mg/L;使加替沙星MIC50從1mg/L降至0.5 mg/L,而MIC90從4mg/L降至1 mg/L。
　　用PCR法從112株腸球菌中擴(kuò)增出57株emeA基因,emeA基因總陽(yáng)性率50.9%。在對(duì)左氧氟沙星、司帕沙星和加替沙星耐藥的腸球菌中,檢出的emeA基因陽(yáng)性率分別為67.9%、67.8%、

6、80.0%,敏感株的emeA基因陽(yáng)性率分別為33.9%、32.1%、44.6%。將emeA片段測(cè)序結(jié)果與GenBank登錄序列在堿基和核苷酸水平進(jìn)行同源性比較,同源性達(dá)到100%。用逆轉(zhuǎn)錄(RT)-PCR法并設(shè)置內(nèi)參照,研究了它們腸球菌emeA基因的mRNA表達(dá)水平,耐藥組emeA基因mRNA表達(dá)量與內(nèi)參灰度比值的平均值為1.485,而敏感組的灰度比值平均值為1.099(P<0.01)。
　　結(jié)論:
　　1.腸球菌在臨床感染

7、中,以糞腸球菌最常見(jiàn),其次是屎腸球菌,其他種類(lèi)腸球菌較少見(jiàn);感染標(biāo)本中,以尿液中分離率最高。
　　2.腸球菌臨床株對(duì)氟喹諾酮類(lèi)藥物均有不同程度耐藥現(xiàn)象。氟喹諾酮類(lèi)藥物對(duì)腸球菌的抑菌活性從強(qiáng)到弱依次為:加替沙星、司帕沙星、左氧氟沙星。
　　3.在112株腸球菌臨床分離標(biāo)本中,基因emeA的總陽(yáng)性率為50.9%;耐藥株的emeA基因陽(yáng)性率高于敏感株,并且耐菌株的emeA基因mRNA表達(dá)水平顯著高于敏感株。
　　4.主動(dòng)外排