辛伐他汀對TNF-α誘導的體外培養(yǎng)骨髓間質(zhì)干細胞凋亡影響的實驗研究.pdf

1、目的：(1)研究辛伐他汀對TNF-α誘導的體外培養(yǎng)骨髓MSCs凋亡的影響。(2)研究辛伐他汀對TNF-α誘導體外培養(yǎng)骨髓MSCs caspase-3蛋白活性的影響。 方法：采取密度梯度離心及反復貼壁細胞分離法，分離和純化小鼠骨髓MSCs，體外培養(yǎng)，選用第4代小鼠骨髓MSCs作為研究對象。(1)MSCs的凋亡率用AnnexinV/PI雙染色進行流式細胞儀檢查技術(shù)，檢測正常對照組； TNF-α刺激組；辛伐他汀預處理組的凋亡率。比較T

2、NF-α刺激組與正常對照組；不同濃度的TNF-α刺激亞組相互間；辛伐他汀預處理組與0.5ng/mlTNF-α刺激亞組；各辛伐他汀預處理亞組與正常對照組以及辛伐他汀預處理亞組相互間凋亡率差別有無統(tǒng)計學意義。(2)采用caspase-3檢測試劑盒，用酶標儀，在λ=405nm測定：正常對照組；TNF-α刺激組；辛伐他汀預處理組的吸光值(OD值)。比較TNF-α刺激組與正常對照組；不同濃度的TNF-α刺激亞組相互間；辛伐他汀預處理組與0.5ng

3、/mlTNF-α刺激亞組，辛伐他汀預處理組與正常對照組以及不同濃度的辛伐他汀預處理亞組相互間OD值差別有無統(tǒng)計學意義。上述數(shù)據(jù)均采用SPASSl3.0統(tǒng)計軟件單因素方差分析，以P＜0.05為差別有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果： (1)各組凋亡率(％)為：正常對照組10.21±1.46；0.05ng/mlTNF-α刺激亞組30.27±2.71；0.5ng/ml TNF-α刺激亞組35.38±2.00；5ng/ml TNF-α刺激亞組41.8

4、±2.53；1.0×10-7M辛伐他汀預處理亞組23.6±2.94；1.0×10-6M辛伐他汀預處理亞組17.18±2.52；1.0×10-5 M辛伐他汀預處理亞組22.68±2.03。(2)各組酶標儀測定的OD值為：正常對照組0.112±0.013；0.05ng/mlTNF-α刺激亞組0.466±0.042；0.5ng/mlTNF-α刺激亞組0.692±0.041；5ng/mlTNF-α刺激亞組0.829±0.040；1.O×10-7

5、M辛伐他汀預處理亞組0.348±0.027；1.0×10-6 M辛伐他汀預處理亞組0.275±0.021；1.0×10-5M辛伐他汀預處理亞組0.350±0.018。經(jīng)統(tǒng)計學分析：TNF-α刺激組與對照組凋亡率及OD值兩兩比較均有統(tǒng)計學意義，p＜0.05；各TNF-α刺激亞組凋亡率及OD值兩兩比較均有統(tǒng)計學意義，p<0.05；辛伐他汀預處理組與0.5ng/mlTNF-α刺激亞組凋亡率及OD值兩兩比較，均有統(tǒng)計學意義，p<0.05，辛伐他

6、汀預處理組與正常對照組凋亡率及OD值兩兩比較有統(tǒng)計學意義，P<0.05；1.0×10-7M辛伐他汀預處理亞組與1.0×10-6 M辛伐他汀預處理亞組MSCs凋亡率及OD值有統(tǒng)計學意義，p<0.05，1.0×10-5 M辛伐他汀預處理亞組與1.0×10-6 M辛伐他汀預處理亞組比較MSCs凋亡率及OD值有統(tǒng)計學意義，p<0.05，1.0×10-5 M辛伐他汀預處理亞組與1.0×10-7 M辛伐他汀預處理亞組比較MSCs凋亡率及OD值無統(tǒng)計

7、學意義，p>0.05。 結(jié)論 (1)TNF-α可誘導體外培養(yǎng)骨髓MSCs凋亡，且MSCs凋亡升高呈TNF-α濃度依賴性。(2)辛伐他汀預處理可部分抑制TNF-α誘導的骨髓MSCs的凋亡。(3)與1.0×10-5M，1.0×10-7M相比，1.0×10-6辛伐他汀預處理為可供選擇的理想濃度。(4)TNF-α誘導體外培養(yǎng)的MSCs凋亡可能部分通過激活caspase-3實現(xiàn)的。(5)辛伐他汀抑制TNF-α誘導MSCs的凋亡可能與其抑制