尿絨毛膜酶試劑盒的研制及在糖尿病腎病早期診斷中的價(jià)值.pdf

1、背景和目的： 腎臟疾患是一類危害人民健康的重要疾患，然而，腎臟損害的早期檢測(cè)是臨床檢驗(yàn)的薄弱環(huán)節(jié)，是目前人們研究的熱點(diǎn)之一。 近年來(lái)，尿酶的檢測(cè)越來(lái)越引起人們的重視，腎小管刷狀緣面向腎小管管腔，是重吸收和物質(zhì)代謝很活躍的部位，對(duì)缺血、缺氧和氧自由基等有害刺激十分敏感。當(dāng)存在腎臟損害的因素時(shí)，首先對(duì)外界刺激進(jìn)行迅速生物反應(yīng)的是腎小管刷狀緣，導(dǎo)致位于刷狀緣的酶在尿中排出增多，尿刷狀緣酶（又稱絨毛膜酶）包括堿性磷酸酶（ALP）

2、與亮氨酸氨基肽酶（LAP）。ALP與LAP在尿中排出增多能較早的反映出腎小管損害，也可在一定程度上及早的提示腎小球的損害。但尿酶的檢測(cè)方法目前僅限于一般化學(xué)方法，這類方法敏感性低、特異性差，不適宜臨床常規(guī)檢測(cè)，迫切需要一種簡(jiǎn)單易行、更為科學(xué)的診斷方法，研制出尿絨毛膜酶試劑盒正是本課題的目的。 大量的流行病學(xué)資料和臨床研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病腎?。―N）是糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥，已成為慢性腎功能衰竭的主要原因之一。將制備的尿酶試劑盒應(yīng)用于DN

3、的早期診斷，并初步制定出ALP與LAP參考值范圍。 研究方法： ①分離純化尿中絨毛膜包囊，制備尿絨毛膜包囊抗體，研究尿絨毛膜酶的存在形式；②設(shè)計(jì)一種免疫測(cè)定方法，將制備的抗體純化后包被酶標(biāo)板，研制出具有較高敏感性和特異性的尿絨毛膜酶（又稱刷狀緣酶）檢測(cè)試劑盒；③將采集到的標(biāo)本按照病程分為A（病程≤3年）、B（病程在3年與10年之間）、C（病程≥10年）三組，對(duì)每組的尿絨毛膜酶進(jìn)行檢測(cè)，與正常對(duì)照組相比，并用尿N-乙酰-β

4、-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）做對(duì)照，將對(duì)照組ALP和LAP的均數(shù)+2倍標(biāo)準(zhǔn)差作為正常值的上限，與尿蛋白定性進(jìn)行異常發(fā)生率的比較。應(yīng)用方差分析、Q檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05為有顯著性差異。 結(jié)果： 1、尿ALP以0.18U/L為上界值，尿LAP以1.74U/L為上界值，其診斷糖尿病腎功能損害的敏感性為95.31％，診斷特異性為89.47％，符合免疫試劑盒的基本要求。 2、糖尿病各組的尿絨毛膜酶均顯著

5、高于正常對(duì)照組，P＜0.05，與尿NAG的結(jié)果相同。 3、糖尿病各組中尿絨毛膜酶的異常發(fā)生率均顯著高于尿蛋白定性的異常發(fā)生率，P＜0.05，而尿絨毛膜酶的異常發(fā)生率與尿NAG的異常發(fā)生率無(wú)明顯差異，P＞0.05。 結(jié)論： 1、尿絨毛膜酶在尿中的存在形式為細(xì)胞膜包囊，典型的脂質(zhì)雙分子層； 2、尿ALP＞0.18U/L，LAP＞1.74U/L者可認(rèn)為糖尿病患者有腎功能的損害； 3、尿絨毛膜酶能及早反映