HIF-1α與鈣信號在低氧下對乳腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移作用的探討.pdf

1、目的： 1.在培養(yǎng)基中加入氯化鈷（CoCl2）模擬化學(xué)缺氧培養(yǎng)細(xì)胞，以觀察低氧條件下缺氧誘導(dǎo)因子-1α（Hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）在人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中的表達(dá)。 2.利用CoCl2建立的低氧模型，觀察鈣信號對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、MCF-7 HIF-1α表達(dá)及其侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。 方法： 1.在培養(yǎng)基中加入CoCl2模擬化學(xué)缺氧，用MT

2、T法檢測CoCl2對乳腺癌細(xì)胞的抑制情況；采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測CoCl2與HIF-1α的mRNA轉(zhuǎn)錄的量-效和時(shí)-效關(guān)系，從而為腫瘤細(xì)胞的缺氧模型選擇一個(gè)最佳的作用濃度和最佳的作用時(shí)間。 2.將實(shí)驗(yàn)分成對照組、加CoCl2組、加CoCl2和鈣通道阻滯劑維拉帕米（verapamil，VPL）組，用RT-PCR方法檢測各組中HIF-1α的mRNA水平；蛋白印跡實(shí)驗(yàn)（Western blotting）和免疫細(xì)胞

3、化學(xué)（Immunocytochemistry）檢測乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231中HIF-1α蛋白的表達(dá)；Millicell小室人工重組基底膜侵襲遷移實(shí)驗(yàn)檢測各實(shí)驗(yàn)組中細(xì)胞侵襲遷移能力的改變。 結(jié)果： 1.150μmol/L CoCl2作用24h可作為最佳的乳腺癌細(xì)胞缺氧模型。 2.兩株細(xì)胞各實(shí)驗(yàn)組都存在HIF-1α的mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白的表達(dá)，加CoCl2組HIF-1αmRNA水平和蛋白水平較對照組顯

4、著增高（P<0.01）；加VPL干預(yù)后，HIF-1αmRNA水平和蛋白水平都大大降低（P<0.01），MCF-7和MDA-MB-231間有顯著差異（P<0.01）；兩株細(xì)胞的侵襲遷移能力VPL+ CoCl2組較CoCl2組明顯降低（P<0.05），MDA-MB-231更明顯（P<0.01）。 結(jié)論： 1.CoCl2可誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞缺氧而使HIF-1α高表達(dá)。 2.阻斷鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可以使HIF-1α的表達(dá)下調(diào)，進(jìn)