AZGP1的原核表達(dá)、多克隆抗體的制備及肝細(xì)胞癌診斷中的應(yīng)用.pdf

1、中圖分類號(hào)U D C碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼密級(jí)1 0 5 3 3A z G P l 的原核表達(dá)、多克隆抗體的制備及肝細(xì)胞癌診斷中的應(yīng)用P r o k a l 了o t i cE x p r e s s i o n ，P o l y c l o n a l A n t i b o d yP r e p a r a t i o no f A Z G P l a n d A p p l i c a t i o n f o rc l i n i

2、c a ld i a g n o s i si nH e p a t o c e U u l a r C a r c i n o m a作者姓名：學(xué)科專業(yè)：研究方向：學(xué)院( 系、所) ：指導(dǎo)教師：李卷臨床醫(yī)學(xué)外科學(xué)湘雅附二醫(yī)院王群偉教授論文答辯日期翅三：! - 鄉(xiāng)／答辯委員會(huì)主席中 南 大 學(xué)2 0 1 3 年5 月碩士學(xué)位論文 中文摘要A Z G P l 的原核表達(dá)、多克隆抗體的制備及肝細(xì)胞癌診斷中的應(yīng)用摘要目的：最新研究發(fā)現(xiàn)A Z

3、G P l 蛋白與肝癌密切相關(guān)，本課題將A Z G P l進(jìn)行原核重組表達(dá)、純化并制備多克隆抗體，初步評(píng)估其在肝細(xì)胞癌診斷中的價(jià)值，為其在臨床上的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。方法：應(yīng)用R T ．P C R 技術(shù)從肝癌組織中擴(kuò)增獲得A Z G P l 全長(zhǎng)，將其克隆至原核表達(dá)載體p E T 2 1a ( + ) ．M B P 內(nèi)，轉(zhuǎn)化大腸桿菌D H l O B ，I P T G誘導(dǎo)其在大腸桿菌B L 2 1 中的表達(dá)，H i s —t a g 磁珠純化

4、試劑盒純化融合蛋白A Z G P l ，S D S ．P A G E 鑒定。然后用純化的A Z G P l 融合蛋白免疫B A L B ／c 小鼠，制備多克隆抗體。采用W - e s t e m - b l o t ，E L I S A 技術(shù)鑒定其抗體的特異性及敏感性，并測(cè)定肝癌病人血清中A Z G P l 蛋白的含量，評(píng)估其在肝細(xì)胞癌診斷中的特異度和敏感度。結(jié)果：1 ．應(yīng)用R T - P C R 技術(shù)，從肝癌組織中擴(kuò)增獲得大約9 0

5、0 b p 的A z G P l 全長(zhǎng)，通過(guò)陽(yáng)性菌落P C R 、酶切鑒定及測(cè)序鑒定表明：成功構(gòu)建了A Z G P l 的原核表達(dá)載體p E T 2 1 a ( + ) 一M B P —A Z G P l 。2 ．通過(guò)I P T G 誘導(dǎo)，融合蛋白A Z G P l 在大腸桿菌B L 2 1 中得以高效表達(dá)，并以包涵體形式存在。變性條件下，經(jīng)H i s —t a g 磁珠純化試劑盒純化，獲得較高純度的融合蛋白，經(jīng)過(guò)復(fù)性并鑒定，融合蛋白恢