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1、目的:檢測(cè)條件恐懼刺激后大鼠杏仁核區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的數(shù)量及神經(jīng)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元的量的變化,探討條件恐懼刺激后大鼠杏仁核區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖及分化與恐懼記憶的關(guān)系。
方法:1.應(yīng)用足底電擊配對(duì)單調(diào)聲刺激的方法建立大鼠條件恐懼記憶模型,并以呆立時(shí)間(freezing time)評(píng)價(jià)大鼠對(duì)條件恐懼刺激事件的記憶。2.應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)條件恐懼刺激后不同時(shí)間點(diǎn)(1、7、14、21、30、60天)大鼠杏仁核區(qū)BrdU(外源性神經(jīng)干細(xì)胞
2、標(biāo)記物)陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)量。3.應(yīng)用免疫熒光雙標(biāo)記法檢測(cè)條件恐懼刺激后不同時(shí)間點(diǎn)大鼠杏仁核區(qū)BrdU與NeuN(神經(jīng)元標(biāo)記物)雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞的量。4.應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
結(jié)果:1.行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示:1、7、14、21、30、60天時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)組大鼠在被重新放入電擊箱給予單調(diào)聲刺激后,八分鐘內(nèi)的呆立時(shí)間明顯長(zhǎng)于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組,差異具有顯著性(P<0.01)。2.BrdU的免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:在大
3、鼠杏仁核區(qū)可見(jiàn)典型的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞,計(jì)數(shù)杏仁核區(qū)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)條件恐懼刺激后各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組大鼠杏仁核區(qū)BrdU免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)少于相應(yīng)對(duì)照組,其中1、7、14、21、30天差異具有顯著性(P<0.05),60天實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.BrdU與NeuN的免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示:在大鼠杏仁核區(qū)可見(jiàn)明顯的BrdU與NeuN雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞,計(jì)數(shù)杏仁核區(qū)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞及BrdU與NeuN的雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)條件恐懼刺激后各
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