PAMAM樹(shù)狀化合物作為呼吸道合胞病毒基因疫苗遞送載體的研究.pdf

1、DNA疫苗能刺激機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫與體液免疫,其制造成本低廉,易于儲(chǔ)存及運(yùn)輸。但是,裸DNA疫苗在體內(nèi)傳輸過(guò)程中,很容易被酶水解,不能引起足夠的免疫原性,很難達(dá)到好的免疫保護(hù)效果。DNA遞送載體能夠保護(hù)DNA分子不被酶水解。本課題選取聚酰胺-胺(PAMAM)樹(shù)狀化合物作為基因疫苗遞送載體,通過(guò)細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)研究了PAMAM G4及PAMAM G5在多種細(xì)胞系中的毒性,在此基礎(chǔ)上初步探索了該樹(shù)狀化合物作為人呼吸道合胞病毒(Hum

2、anrespiratory syncytial virus,RSV)基因疫苗載體的在動(dòng)物模型上應(yīng)用。
　　 選取多個(gè)不同的電荷(N/P)比,制備PAMAM/DNA復(fù)合物,瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果表明,PAMAM G4及PAMAM G5都能夠與DNA形成復(fù)合物。酶切保護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,形成復(fù)合物后,DNA不被核酸酶降解,即PAMAM能夠有效保護(hù)所攜帶的DNA分子不被降解。為進(jìn)一步探索PAMAM的細(xì)胞毒性,分別選取了HEK293細(xì)胞、Hep

3、G2細(xì)胞、U251細(xì)胞及A549細(xì)胞進(jìn)行毒性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明,對(duì)于同種細(xì)胞系PAMAM G5的細(xì)胞毒性高于PAMAM G4的細(xì)胞毒性。PAMAMG448 h的半抑制率在0.1μg/μL,而PAMAM G548 h的半抑制率在0.05μg/μL。對(duì)于同一種PAMAM載體,隨著濃度的增加毒性增大,細(xì)胞毒性呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性。細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,PAMAM在加入24 h后能夠?qū)е乱恍┘?xì)胞壞死或晚期凋亡,早期凋亡現(xiàn)象不明顯,同時(shí),細(xì)胞壞死或晚期凋亡