黑大豆皮中色素的提取純化、結(jié)構(gòu)鑒定及其性質(zhì)的研究.pdf

1、黑大豆在我國北方山區(qū)分布廣泛，具有絕對的資源優(yōu)勢，而且栽培面積還在不斷的擴大。黑大豆皮在化妝、保健食品加工方面有著廣泛的用途。有研究表明：黑大豆皮中的花色苷具有抗氧化和清除自由基功能。本試驗以東北農(nóng)業(yè)大學(xué)大豆研究中心提供的黑大豆為原料，探索黑大豆皮中的花色苷的提取、分離工藝，并對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析研究，為黑大豆皮進(jìn)一步廣泛開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)，以促進(jìn)黑大豆皮的利用價值。 ⑴在溶劑法中，對pH值，料液比進(jìn)行單因素試驗，通過控制提取溫度

2、、提取時間、溶劑濃度，以吸光值為指標(biāo)，采用三因素三水平正交試驗確定最佳的提取條件，確定了試驗最優(yōu)提取條件為：最佳pH值為4-6，料液比為1:40，溶劑濃度為60％，提取時間為1小時，提取溫度為60℃，得到的提取液稀釋到200ml，其吸光值為0.865。 ⑵在超聲波法中，通過控制超聲功率，超聲時間、溶劑濃度，料液比，以吸光值為指標(biāo)，采用四因素三水平正交試驗確定最佳的提取條件，確定了試驗最優(yōu)提取條件為：溶劑濃度40％，超聲功率600

3、w，料液比1:30，超聲時間40min。得到的提取液稀釋到200ml，其吸光值為0.795，可知，溶劑法提取的效果比超聲波法要好。 ⑶在提取物分離工藝中，引入了大孔吸附樹脂、SephadexLH-20凝膠柱色譜技術(shù)。通過對樹脂種類的篩選、影響吸附和解吸因素的研究，建立了大孔樹脂純化黑大豆皮提取物的工藝：選用AB-8大孔吸附樹脂為吸附劑，分離黑大豆皮中的花色苷較適宜的吸附條件為：流速2mL/min、濃度0.074mg/mL、pH為

4、6左右；較適宜的解吸條件為：洗脫劑為60％乙醇溶液，流速為2mL/min。以此工藝?yán)L制的洗脫曲線結(jié)果表明，采用此純化工藝取得較理想效果，洗脫峰集中，對稱性好，無明顯拖尾現(xiàn)象，其吸附率為80％，解析率為80％。聚酰胺純化黑大豆皮色素，濃度為0.086mg/mL，500％乙醇水溶液，流速為2mL/min，pH為6左右，洗脫效果較好。其吸附率為60％，解析率為700％。 ⑷采用大孔樹脂法對黑大豆皮中的花色苷進(jìn)行純化。用Sephadex

5、LH-20凝膠柱色譜對花色苷進(jìn)行分離，用60％甲醇溶液進(jìn)行洗脫，洗脫流速為1mL/min，通過TLC、HPLC檢測，合并相同組分，得到化合物；TLC和HPLC檢測，檢驗了該物質(zhì)的純度；運用紫外、核磁共振波譜學(xué)，結(jié)合化學(xué)定性鑒別的方法，對化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，確定該物質(zhì)為3-半乳糖-矢車菊色素。對得到的花色苷進(jìn)行酸法和酶法水解進(jìn)行比較，在酸法水解中水解溫度為90℃，水解時間30min，料液比1:30，鹽酸乙醇溶液濃度1.5mol/L，水解