MARVELD1-Tet-on細(xì)胞株的建立及其細(xì)胞力學(xué)性能分析.pdf

1、MARVELD1(MARVEL domaincontainingl)是一個(gè)由本課題組發(fā)現(xiàn)的一個(gè)腫瘤抑制基因,GenBank編號(hào)為AF325259。課題組前期在對(duì)其功能研究時(shí)發(fā)現(xiàn),MARVELD1影響了細(xì)胞粘附、遷移等生物學(xué)過程。腫瘤細(xì)胞間的同質(zhì)性粘附降低、與周圍組織的異質(zhì)性粘附增強(qiáng),是惡性腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移和侵襲的重要條件,而腫瘤細(xì)胞的增殖、分化和遷移等過程又與細(xì)胞力學(xué)性質(zhì)的變化關(guān)系密不可分。這提示了MARVELD1和細(xì)胞表面粘附性的變化及細(xì)

2、胞本身的力學(xué)性能可能有密切關(guān)系。
　　建立可控性基因表達(dá)體系對(duì)研究基因的功能極為重要,因此本課題旨在構(gòu)建一個(gè)能夠調(diào)控MARVELD1開/關(guān)性表達(dá)的細(xì)胞株,并選用目前廣泛認(rèn)可的Tet基因表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)為模型。本課題選用不表達(dá)MARVELD1的HepG2細(xì)胞系進(jìn)行MARVELD1-Tet-on細(xì)胞株的構(gòu)建,根據(jù)實(shí)驗(yàn)手冊(cè)提供的方法,分別轉(zhuǎn)染pTet-on質(zhì)粒和pTRE2hygMARVELD1重組體,并進(jìn)行穩(wěn)定克隆篩選。對(duì)篩選后的克隆進(jìn)行強(qiáng)

3、力霉素誘導(dǎo),并分別提取蛋白進(jìn)行MARVELD1的WesternBlot檢測,最終獲得一株誘導(dǎo)效果穩(wěn)定且背景干擾低的MARVELD1-Tet-on細(xì)胞株,實(shí)現(xiàn)了在HepG2中對(duì)外源MARVELD1的開/關(guān)調(diào)性控表達(dá)。
　　之后,本課題對(duì)MARVELD1-Tet-on細(xì)胞株進(jìn)行了細(xì)胞形態(tài)及力學(xué)性能分析。分別使用光學(xué)顯微鏡高倍鏡及掃描電子顯微鏡對(duì)誘導(dǎo)MARVELD1表達(dá)和未經(jīng)誘導(dǎo)的MARVELD1-Tet-on細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)觀測,發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)

4、MARVELD1表達(dá)的細(xì)胞株,其細(xì)胞表面更為鋪展,呈細(xì)長型,細(xì)胞間連接豐富,而未經(jīng)誘導(dǎo)的細(xì)胞呈扁圓型,區(qū)別明顯,可見MARVELD1對(duì)細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞粘附性產(chǎn)生了一定影響。最后,利用原子力顯微鏡對(duì)誘導(dǎo)MARVELD1表達(dá)和未經(jīng)誘導(dǎo)的細(xì)胞進(jìn)行液下活體掃描,獲得了細(xì)胞表面形貌圖及若干組力-距離曲線。由于原子力顯微鏡與生物樣品接觸過程近似滿足赫茲接觸理論,將若干組力-距離曲線進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后,帶入赫茲模型得到樣品的楊氏模量。結(jié)果顯示,經(jīng)過誘導(dǎo)的