角膜血管膜上皮細(xì)胞表型鑒定及新生血管相關(guān)靶點(diǎn)的篩選.pdf

1、目的:通過鑒定臨床角膜血管膜標(biāo)本的上皮細(xì)胞表型,檢測(cè)新生血管相關(guān)因子的表達(dá)情況,探討Avastin等抗VEGF藥物治療角膜新生血管療效差異懸殊的可能原因,篩選角膜新生血管治療相關(guān)的靶點(diǎn)因子,并通過小鼠角膜新生血管模型進(jìn)行驗(yàn)證。
　　 方法:本研究共收集26例新生血管性角膜病患者的角膜新生血管膜組織,包括一次血管膜組織19例,其中化學(xué)傷8例、熱燒傷7例、爆竹炸傷3例、眼瘢痕性類天皰瘡1例;二次血管膜組織7例,其中化學(xué)傷5例、熱燒傷

2、1例、Stevens-Johnson綜合癥1例。通過免疫組織化學(xué)方法,檢測(cè)血管膜中上皮細(xì)胞的表型,并與角膜和結(jié)膜上皮進(jìn)行比較。應(yīng)用基因表達(dá)芯片篩選血管膜中高表達(dá)的新生血管調(diào)控因子,并通過實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)行驗(yàn)證。最后,通過建立縫線、堿燒傷、貫通傷及接觸鏡誘導(dǎo)的小鼠角膜新生血管模型,觀察角膜新生血管的動(dòng)態(tài)生長情況,檢測(cè)VEGF等新生血管關(guān)鍵調(diào)控因子的表達(dá)變化,對(duì)臨床標(biāo)本的結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。
　　 結(jié)果:通過免疫組織化學(xué)染色對(duì)一次和二次血

3、管膜組織的上皮細(xì)胞進(jìn)行表型鑒定,發(fā)現(xiàn)血管膜的上皮表現(xiàn)為角蛋白CK3-、CK19+、P63+/-,與正常結(jié)膜上皮的表型類似。在24例臨床血管膜標(biāo)本中(化學(xué)傷13例、熱燒傷8例、爆竹炸傷3例),篩選并驗(yàn)證出15個(gè)新生血管相關(guān)的關(guān)鍵調(diào)控因子,但均未檢測(cè)到VEGF的高表達(dá)。通過對(duì)縫線、堿燒傷、貫通傷及接觸鏡誘導(dǎo)的角膜新生血管小鼠模型的檢測(cè)發(fā)現(xiàn),四種模型的小鼠角膜中VEGF的表達(dá)呈現(xiàn)相似的變化趨勢(shì),術(shù)后早期(1-14天)VEGF表達(dá)均有不同程度的

4、增高,但隨后迅速降低至正常水平。通過對(duì)臨床標(biāo)本篩選出的15個(gè)新生血管調(diào)控因子的驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)其中11個(gè)因子在小鼠模型中呈現(xiàn)相似的表達(dá)趨勢(shì),按功能分為生長因子類(PLXDC1、TGFB2、EREG)、細(xì)胞因子及受體類(IL6、IL1β、TNFRSF12a)、蛋白酶類(MMP2、FAP)、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子(NOTCH4、HEY2)和SFRP2。
　　 結(jié)論:臨床新生血管性角膜病患者的角膜血管膜組織,其上皮均呈現(xiàn)結(jié)膜表型,但血管膜組織中