脂筏在TRAIL引起的細(xì)胞凋亡早期事件中的作用研究.pdf

1、TRAIL是TNF家族的成員之一，與其他成員不同的是TRAIL和其受體在絕大多數(shù)細(xì)胞和組織中均有表達(dá)，但TRAIL可選擇性地殺傷腫瘤細(xì)胞，對大多數(shù)正常細(xì)胞沒有細(xì)胞毒作用。由于這種特性的存在，TRAIL成為一種極具治療前景的抗癌藥物。然而，隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)有許多腫瘤細(xì)胞對TRAIL并不敏感，這在一定程度上限制了TRAIL的應(yīng)用。本研究利用實驗室保存的兩株對TRAIL敏感性不同的Jurkat T淋巴細(xì)胞為模型，探討其敏感性不同的原因

2、，重點關(guān)注TRAIL誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡早期階段的差別。 脂筏是細(xì)胞膜上的特殊微區(qū)，其中含有大量的膽固醇和鞘磷脂，因為這兩種脂類的穩(wěn)定性較強(qiáng)，可以使脂筏微區(qū)與其它磷脂雙層分相，并為許多膜蛋白和病原體提供進(jìn)出細(xì)胞和下傳信號的平臺。由于脂筏是接受大多數(shù)外界信號刺激的門戶，本研究假定兩株Jurkat T淋巴細(xì)胞對rsTRAIL敏感性不同的原因可能與脂筏有關(guān)。對于TRAIL的敏感性與脂筏微區(qū)關(guān)系的研究，目前還是空白。 首先以自己制備的重

3、組可溶性TRAIL(rsTRAIL)處理兩株Jurkat T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)二者對TRAIL細(xì)胞毒作用的敏感性存在明顯差別。對TRAIL敏感的稱JKS細(xì)胞，對TRAIL不敏感的稱為JKR細(xì)胞。Western Blot分析顯示，JKS細(xì)胞經(jīng)rsTRAIL處理后，其細(xì)胞漿中的促凋亡分子procaspase—8和RIP表達(dá)減少，而在JKR細(xì)胞中檢測不到這種變化。而且未經(jīng)rsTRAIL處理的JKS細(xì)胞內(nèi)procaspase—8的表達(dá)量也

4、比JKR細(xì)胞為多。rsTRAIL處理使JKS細(xì)胞膜中的procaspase—8、RIP和FADD發(fā)生相應(yīng)的募集或減少，而JKR細(xì)胞膜中的FADD和RIP未發(fā)生明顯變化，procaspase—8則檢測不到，提示procaspase—8表達(dá)量低可能是JKR細(xì)胞對TRAIL不敏感的原因。但是caspase—8抑制劑能全部抑制rsTRAIL引起的JKR細(xì)胞凋亡，但只能部分抑制JKS細(xì)胞凋亡，抑制率約為50％，表明procaspase—8的表達(dá)量

5、差別不能完全解釋這兩株細(xì)胞對TRAIL敏感性的不同，procaspase—8的上游因素可能也影響細(xì)胞對TRAIL的敏感性。 進(jìn)一步研究了兩株細(xì)胞脂筏成分的變化，結(jié)果表明兩株細(xì)胞受到TRAIL刺激后，募集促凋亡分子的能力不同。DR5、FADD、procaspase—8、RIP和PI3K-P85亞基在JKS細(xì)胞中均是脂筏預(yù)裝蛋白，TRAIL刺激20分鐘內(nèi)DR5、FADD、procaspase—8和PI3K-P85亞基均增加，而RIP

6、減少。盡管DR5和RIP在JKR細(xì)胞中是脂筏預(yù)裝分子，但隨TRAIL刺激的延長，并沒有檢測到兩種分子的變化，而DISC復(fù)合物中的FADD和procaspase—8沒有出現(xiàn)在脂筏樣品中，PI3K-P85亞基只在20分鐘時有輕微增加。 進(jìn)一步研究顯示，脂筏募集蛋白能力的這種差別與酸性鞘磷脂酶有關(guān)。JKR細(xì)胞中的酸性鞘磷脂酶較少，而JKS細(xì)胞中較多。該酶的活性分析表明，JKR細(xì)胞酸性鞘磷脂酶的活性較低，神經(jīng)酰胺的增加和鞘磷脂的減少都不

7、及JKS細(xì)胞明顯，JKS細(xì)胞的酸性鞘磷脂酶的本底活性較JKR細(xì)胞為高，4小時時神經(jīng)酰胺增加的倍數(shù)達(dá)到6.3倍以上。酸性鞘磷脂酶與脂筏的共定位研究顯示，JKR細(xì)胞接受TRAIL刺激后，酸性鞘磷脂酶與脂筏逐漸共定位，有時空的變化。JKS細(xì)胞的酸性鞘磷脂酶與脂筏始終是密切共定位，不存在時空的變化。說明JKS細(xì)胞中的酸性鞘磷脂酶能夠在脂筏原位發(fā)揮更強(qiáng)大的作用，利于脂筏中促凋亡分子的募集。 綜上所述，兩株JurkatT淋巴細(xì)胞中酸性鞘磷脂